猪→猴异种造血嵌合体模型的建立及其凝血机制的变化

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1、第四军医大学博士学位论文猪→猴异种造血嵌合体模型的建立及其凝血机制的变化姓名：单飞申请学位级别：博士专业：外科学（心血管外科）指导教师：蔡振杰2003.5.1、沁；_l秉承学校严谨的学风与优良的科学道鼍，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽莸所知，除了文中特嗣加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他^已申请学位或其他用途使用过的成果。与莪一同工作的同志对本研究所徽的任何贡献均已在论文中作了明确的说啊并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切柑关责任。、，论文作者签名：墼坠日期：!；垒二!!本

2、A完全了解第四军区大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在较攻读学位期iiO论文T作的知识产权单位晨第四军医大学。本A保证毕业离校后，发表论文或使用论文T作成果时署名单位仍然为第四军压大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查明和借阗；学校可以公布论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他复嗣手段保存论文。论文舱弥驰殳翩签各日期：坐趔i第四军医大掌博士学位论文英文缩略词表英文缩写AHXRBMCD46CD59CSACVFDAFGVHDHARmAbMHCPAGEPBMCPBSPBSTPCRPMSFSDSTxTaqAbbreviation英文全名acutehumora

3、lxenograftrejectionbonemarrowmembranecofactorproteinmembraneregulatorproteincyclosporineAcobravenomfactordecayacceleratingfactorgraftversushostdiseasehyperacuterejectionmonoclonalantibodymajorhistocompatibilitycomplexpolyacrylamidegelelectrohporesisperipheralbloodmOnOnucIearcelIphosphatebuffereds

4、alinephosphatebufferedsalinetweenpolmerasechainreactionphenylmethylsulfonylfluoridesodiumdodecylsulfatetransDIantatiOnthermosaquaticus中文译名急性异种移植体液排斥骨髓膜辅助因子蛋白膜性调节蛋白环孢素A蛇毒因子衰变加速因子移植物抗宿主病超急性排斥单克隆抗体主要组织相容性复合体聚丙烯酰胺凝胶电泳外周血单个核细胞磷酸缓冲盐液磷酸缓冲盐吐温液聚合酶链式反应苯甲基磺酰氟十二烷基磺酸钠移植嗜热菌第四军医大掌博士掌l'tr论文IrisN．tris(hydroxymeth

5、yl)N一(羟甲基)氨基甲烷aminomethaneWesternblotXTxxenOtransDIantatiOn-2．蛋白质印记转移异种移植第四军医大掌博士学位论文猪一猴异种造血嵌合体模型的建立及其凝血机制的变化研究生单飞导师蔡振杰教授第四军医大学西京医院一11,血管外科中心西安710032摘要，f同种器官移植已取得瞩目成绩，但供体器官的来源短缺却越来越成为限制器官移植发展的瓶颈。而异种移植成为解决这～问题的潜在途径。带有人类基因的转基因动物的培育以及建立供受体造血嵌合体而诱导免疫耐受是今后异种移植的发展方向。我们曾经通过胸腺骨髓联合移植成功地建立了大鼠一兔的异种骨髓嵌合体模型，不

6、仅使供体细胞在受体体内达到了长期嵌合，而且发现在受体兔体内的大鼠源性细胞免疫功能正常，即在受体兔体内存在着两种正常的免疫系统。此结果令人鼓舞。但我们研究的仅是小动物模型，与临床应用相距甚远，因而实践中需要建立与人关系更近的哺乳类大动物模型以研究异种骨髓移植问题。猪目前是世界公认的最适合的异种器官供体，故本课题拟选用猪及猴作为供受体，通过异种胸腺、骨髓联合移植建立异种造血嵌合体模型进行异种移植研究。J目的：本文准备通过猪～猴骨髓和胸腺联合移植，在受体猴体内建立猪的免疫系统，观察受体猴体内猪细胞的嵌合情况，从而诱导对供体产生免疫耐受。同时观察移植后受体的凝血机制的变化。／方法：第四军医大学博

7、士学位论文1．受体猴预处理：去脾，移植前进行2—4次环磷酰胺处理并使用一定剂量的免疫抑制剂(酶酚酸酯、环孢霉素)。2．猪胸腺、骨髓移植：骨穿针取猪骨髓。制成2×10“／ml骨髓细胞悬液，静脉输入受体猴体内，按2—4×10“个细胞／公斤体重。胸腺移植：将胸腺分成约3×3×3mml大小的组织块，菌操作，植入受体猴颈部及背部皮下(分3～4处，每处植入2～3块)。移植后使用ALG和免疫抑制剂。3．鉴定：通过PCR方法检测受体猴外周血有核细胞