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1、猪人工授精－实验室关键技术中国农业大学动物科技学院朱士恩zhushien@cau.edu.cnTel:010-627317672007.04.26报告内容猪人工授精的历史及现状猪人工授精的实验室设备猪人工授精的意义猪精液的人工采集猪精液的品质检查猪精液的保存处理猪精液处理后输精猪人工授精的历史及现状该技术始于20世纪30年代，已有70多年的历史我国始于上世纪50年代，未达到理想的推广程度20世纪90年代后，该技术得到迅速普及目前该技术已成为猪配种繁殖的主要手段之一猪人工授精的意义减少饲养头数，充分发挥优秀
2、公猪的遗传潜力减少疾病传播，提高生产效率，获得更高的经济效益与繁殖控制技术结合，利于现代化养猪技术体系建立精液保存技术的发展，加快猪育种进程公畜使用不受其生理年限限制便于引入外源群体基因，加快遗传进展的扩散速度实现科学养猪，养猪生产规模化，现代化的重要手段精液的冷冻保存，可降低活体保种成本，防止基因漂变猪人工授精的实验室设备仪器显微镜、精子密度测定仪、电子天平、恒温水浴锅、恒温精液保存箱、pH计（试纸）、精子计数数器、移液器等器皿温度计、量筒、烧杯、保温瓶、采精杯、玻璃棒等消耗品纱布、输精瓶、输精管、乳胶
3、手套、采精袋、稀稀释粉等猪精液的采集采集前的准备工作猪精液采精的方法精液采集前的准备工作实验室的准备精液稀释液准备操作人员的准备采精器皿的准备检测仪器的准备分装器皿的准备采精公猪的准备猪的人工采精方法电刺激采精法手握采精法假阴道采精法手握采精法用温的生理盐水清洗猪腹部和包皮一手带双层手套，另一手持集精杯公猪伸出阴茎时，脱去外层手套用手紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲拉直收集浓份精液于集精杯的一次性采精袋采精流程成年公猪：2次/周采精频率青年公猪：1次/周猪精液的品质检查品质检查
4、的目的精液显微镜检查精液外观检查精液的外观检查颜色乳白色或浅灰色呈云雾状绿色、黄色浅红色、红褐色气味略带腥味恶臭等异常气味pH值正常精液pH值为7.0~7.8pH值越低,精子密度越大采精量电子天平称量法按1g=1ml计射精量为200~500ml正常正常异常异常精液的显微镜检查精子活率检查精子畸形率检查精子密度检查精子活率检查玻片升温至37℃取精液10µl制片于37℃恒温台上相差显微镜下400倍观察精子与受精能力相关精子活率精液品质的指标按0.1~1.0的十级评分法进行评估目测估测法活率要求鲜精活率＞0.7
5、才可进行稀释配制保存精液活率＞0.6才可以使用精子密度检查估测法精子密度仪法血细胞计数法主观性强，误差大＜一个精子为“密”＝一个精子为“中”＞一个精子为“稀”最准确，但速度慢滴上1滴稀释精液原精液200μL3%NaCl稀释10倍计数板上放盖玻片计数5个中方格精子将该数乘以50万方便、时间短、重复性好猪精子密度一般为2~3亿/ml生产上主要以精子密度仪法检测精子计数注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释后精液注入计数室共有两个对称的计数室精子计数精子计数室及一个中方格精子计数方法以图示次序计数
6、，精子的头部为准，依数上不数下，数左不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数计算公式1ml原精液内的精子数＝5个中方个数的精子数×5×10×1000×稀释倍数（如为原精液不×稀释倍数）精子畸形率检查取中层精液抹片固定液固定20minGiemsa染色90min水洗并风干置1000倍油镜下观察精子＞300个畸形率检查方法相差显微镜直接观察伊红或姬姆萨等染色后普通显微镜观察畸形率要求一般要求不超过18%为宜染色后显微镜观查仪器观察精子活力及膜的完整性A.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阴性。B
7、.死精子区域:PI,阳性;AnV-FITC,阳性。C.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阴性。D.活精子区域:PI,阴性;AnV-FITC,阳性。A)H33342标记所有精子细胞核呈现蓝色荧光；PI标记死精子的细胞核呈现红色荧光；发生顶体反应或顶体膜破损的精子被FITC-PNA标记,呈现绿色顶体。荧光显微镜下观察精子的活力和顶体状态流式细胞仪观察精子的活力和顶体状态B)C)猪精液的保存处理精液的稀释精液的分装精液的保存精液的冷冻及解冻精液的运输精液的稀释器具须消毒，使用前，用少量稀释液冲洗一遍品质
8、检查不合格(活率＜0.7)的精液不能稀释精液采集后尽快稀释,原精贮存时间不宜超过30min稀释时严禁太阳光直射精液,应于较暗处操作精液要求等温稀释,以精液为标准,调节稀释液温度稀释液沿杯壁加入到精液中,沿一个方向搅拌混匀高倍稀释时先进行低倍稀释,以防“稀释打击”稀释倍数:根据精液的品质,输精量,配种母猪头数以每个输精剂量40亿/80~100ml来确定稀释倍数稀释后要求静置片刻再作精子活率检查采精量200ml,活率0.8,密度2
