生物技术第二讲植物组培的培养基

生物技术第二讲植物组培的培养基

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1、第二讲培养基目的要求:一、掌握培养基的种类及其特点三、掌握培养基的组成和其适宜剂量二、掌握MS培养基配制四、理解培养基筛选方法第一节培养基的种类和成分一、培养基种类▼二、培养基成分▼第二节培养基制备▼一、母液配制和保存二、培养基配制、分装和灭菌▼第三节培养基的选择▼一、单因子试验二、多因子试验三、逐步增减法四、广谱实验法一、培养基的种类1、根据其态相不同分为固体培养基与液体培养基。固体培养基是指加凝固剂的培养基。培养基中加入一定量的凝固剂,加热溶解后,分别装入常用的培养容器中冷却后即得到固体培养基。液体培养基是指不加凝固剂的培养基。培养基种类固体培养基液体培养基▲营养分布

2、均匀,生长整齐一致,但通气性差。通气性较好,便于操作,但营养分布不均,生长发育不整齐。二者比较2、根据培养物的培养过程培养基分为:初代培养基和继代培养基外植体:从植物体上取出的用于无菌培养的植物材料。植物材料:茎尖、茎段、花瓣、叶子、花药等初代培养:指用来第一次接种从植物体上分离下来的外植体过程。继代培养:对培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离,进行连续多代的培养,就称为继代培养。3、根据其作用不同,培养基分为:诱导培养基增殖培养基生根培养基4、根据其营养水平不同,培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基(就是通常称呼的培养基)主要有M

3、S、White、N6、B5、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。完全培养基就是基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质,如生长调节物质和其他复杂有机物质等。常用培养基种类MS培养基B5培养基White培养基N6培养基KM-8P培养基★有机成分复杂,它包括了所有的单糖和维生素用于原生质体培养(包括原生质融合的培养)KM-8P培养基特点:N6培养基特点:1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计成分简单KNO3和(NH4)2SO4含量高广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等White培养基特点:1943年由White为培养番茄根尖

4、而设计的。1963年又作了改良,称作White改良培养基。特点:无机盐含量较低适用:生根培养。B5培养基特点:含较低的铵双子叶植物尤其木本植物组培可选择MS培养基特点:无机盐、离子浓度高,硝酸盐含量较高。▲MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。无机盐的浓度较高,能保证组织培生长所需的矿物质营养。并且因为离子浓度高,在配制、贮存、消毒过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响培养基中的离子平衡二、培养基成分水植物激素无机盐有机物培养体支持材料辅助性物质▲一、无机盐▲氮枝叶生长需要氮素,缺氮老叶先发黄;氮过量,枝叶过度茂盛。磷缺磷,植株生长缓慢,老叶暗紫色。钾促进花卉生长健壮

5、,增强抗性,茎秆挺拔。缺钾,叶尖、叶缘枯焦,叶片呈皱曲状,老叶发黄或火烧状。钴缺钴,叶片失绿而卷曲,整个叶片向上弯曲凋枯。二、有机物维 生 素肌   醇氨 基 酸天然复合物椰子汁(CM)酵母浸出液(YE)水解酪蛋白(CH)碳水化合物马铃薯汁液其   它▲碳水化合物选用种类:蔗糖(或葡萄糖、果糖)等蔗糖浓度:2%~3%,胚培养为4%~15%大生产时可用白糖▲糖在培养基的作用:1)为细胞提供合成新物质的碳骨架2)为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3)维持渗透压种类:VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VB3(烟酸)、Vc(抗坏血酸浓度:0.1-1.0mg/L作用:VB1促

6、愈伤组织产生,提高活力VB6促根生长Vc防组织褐变VB3与植物代谢和胚的发育有关系维 生 素▲氨基酸:甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同,其种类和浓度不同。肌醇:又称环己六醇,在糖类的转化中起作用名称分子量溶解性质性质蔗糖342.30溶于水、乙醇无变旋现象山梨糖180.16溶于水甜味与蔗糖相似葡萄糖180.16溶于水有变旋现象,以游离态或磷酯形式存在果糖180.16溶于水、乙醇有变旋现象,甜度高于蔗糖盐酸硫胺素(VB1)337.28溶于水、乙醇、甘油受高温影响小,可高温消毒核黄素(VB2)376.37溶于无水乙醇、微溶于水

7、等电点PH=6.0,碱性溶液中易变质,光能加速变质盐酸吡哆素(VB6)205.64溶于水、乙醇对光、空气、热稳定是转氨酶的辅酶钴胺素(VB12)1355.42溶于水、乙醇受高温影响小,可高温消毒,参与丝氨酸转变为甘氨酸过程烟酸(VPP)123.11极易溶于水、乙醇对空气、光、热、PH值稳定生物素(VH)244.31溶于水、乙醇对空气温度稳定叶酸(VM)441.40易溶于乙酸、NaOH、微溶于水参与生物甲基化作用抗坏血酸(VC)176.12极易溶于水有较强的还原能力,可做抗氧化剂用,参与酪氨酸代谢及色氨酸的羟基化作用肌醇180.

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