小麦粉中间苯二酚的测定 高效液相色谱法BJS 202009.pdf

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1、食品补充检验方法犅犑犛２０２００９小麦粉中间苯二酚的测定高效液相色谱法２０２０１１１９发布国家市场监督管理总局发布犅犑犛２０２００９小麦粉中间苯二酚的测定高效液相色谱法１范围本方法规定了小麦粉中间苯二酚含量的液相色谱测定方法。本方法适用于小麦粉中间苯二酚的测定。２原理试样中的间苯二酚经甲醇提取，蛋白沉淀剂沉淀，采用液相色谱Ｃ１８Ａｍｉｄｅ柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。３试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１试剂３．１．１甲醇（ＣＨ３ＯＨ）：色谱纯。３．１．２亚铁氰化钾［Ｋ

2、４Ｆｅ（ＣＮ）６·３Ｈ２Ｏ］。３．１．３乙酸锌［Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２·２Ｈ２Ｏ］。３．１．４冰醋酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）。３．２试剂配制３．２．１亚铁氰化钾溶液（９２ｇ／Ｌ）：称取１０６ｇ亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至１０００ｍＬ。３．２．２乙酸锌溶液（１８３ｇ／Ｌ）：称取２２０ｇ乙酸锌溶于少量水中，加入３０ｍＬ冰醋酸，用水定容至１０００ｍＬ。３．３标准品３．３．１间苯二酚标准品（Ｃ６Ｈ６Ｏ２，ＣＡＳ号：１０８４６３，相对分子质量１１０．００）或经认证并授予标准物质证书的标准物质。３．４标准溶液的配制３．４．１间苯二酚标准储备液

3、（１．００ｍｇ／ｍＬ）：准确称取间苯二酚标准品（３．３．１）１０ｍｇ（精确至０．１ｍｇ），用甲醇（３．１．１）溶解，配制成质量浓度为１．００ｍｇ／ｍＬ标准储备液，－１８℃避光保存，不超过２周。３．４．２标准中间液：准确移取１．００ｍＬ间苯二酚标准储备液（３．４．１）于１０ｍＬ和１００ｍＬ容量瓶中，用甲醇（３．１．１）稀释至刻度，摇匀，制备质量浓度为１００μｇ／ｍＬ和１０．０μｇ／ｍＬ的标准中间液。临用现配。３．４．３标准工作溶液：吸取间苯二酚标准中间液（３．４．２），用甲醇（３．１．１）稀释成质量浓度分别为０．０１００μｇ／ｍＬ、０．０２

4、００μｇ／ｍＬ、０．１００μｇ／ｍＬ、０．５００μｇ／ｍＬ、１．００μｇ／ｍＬ、５．００μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ标准工作溶液。临用现配。１犅犑犛２０２００９３．５材料３．５．１微孔滤膜：有机相，孔径０．２２μｍ。３．５．２比色管：２５ｍＬ。４仪器和设备４．１高效液相色谱仪，配荧光检测器。４．２电子天平：感量分别为０．１ｍｇ和０．００１ｇ。４．３涡漩振荡器。４．４超声波清洗器。４．５高速离心机。４．６样品粉碎机。５试样制备与保存取代表性的试样不少于２００ｇ，装入洁净容器内密封并做好标识，置于阴凉干燥处保存。６测定步骤６．１试样处理称取

5、５ｇ试样（精确至０．００１ｇ）于２５ｍＬ比色管中，加入１５ｍＬ甲醇（３．１．１）涡漩混匀，超声１５ｍｉｎ，放置至室温后加入１ｍＬ亚铁氰化钾溶液（３．２．１）和１ｍＬ乙酸锌溶液（３．２．２），用甲醇定容至刻度，混匀１ｍｉｎ。于７０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，取适量上清液过０．２２μｍ有机相滤膜，待液相色谱测定。６．２仪器参考条件仪器参考条件如下：ａ）色谱柱：Ｃ１８Ａｍｉｄｅ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，３μｍ）或性能相当者；ｂ）流动相：Ａ为水，Ｂ为甲醇，梯度洗脱条件见表１；ｃ）柱温：４０℃；ｄ）进样体积：１０μＬ；ｅ）荧光检测器，激发波长２７

6、３ｎｍ，发射波长３０４ｎｍ；增益值：无增益。表１梯度洗脱程序时间／ｍｉｎ流速／（ｍＬ／ｍｉｎ）Ａ／％Ｂ／％０．０１０．７０９８．０２．０１０．０００．７０６０．０４０．０１１．０００．７０９８．０２．０１５．０００．７０９８．０２．０２犅犑犛２０２００９６．３标准工作曲线制作将间苯二酚标准工作溶液（３．４．３）按浓度从小到大依次注入液相色谱仪，测定相应的峰面积，以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。间苯二酚标准溶液色谱图参见附录Ａ。６．４试样溶液测定将待测液（６．１）注入液相色谱仪，外标法定量。标准溶液及试样溶液中间苯

7、二酚的响应值均应在仪器检测的线性范围内。若试样中间苯二酚的测试浓度超出本方法的线性范围，应进行适当稀释后测定。６．５空白试验除不加试样外，均按试样同法操作。７结果计算试样中间苯二酚的含量按式（１）计算：犡＝ρ×犞犿××犳１０×０１００００…………………………（１）式中：犡———试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；ρ———由标准工作曲线得到的被测组分溶液的质量浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犳———稀释倍数；犿———称样量，单位为克（ｇ）。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留

8、３位有效数字。８检测方法的灵敏度、准确度、精密度８．１灵敏度按取样量５ｇ，定容体积为２５ｍＬ时，小麦粉中间苯二酚的检出限为０．０２ｍｇ／ｋｇ、定量限为０．０５ｍｇ／ｋｇ。８．２准确度本方法在０