大鼠放射性肺损伤过程中乌司他丁的影响论文

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时间:2018-11-21

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1、大鼠放射性肺损伤过程中乌司他丁的影响论文放射性肺损伤是临床胸部肿瘤放疗、骨髓移植预处理、平时核辐射事故及战时核辐射后严重并发症.研究发现转化生长因子β1(TGFβ1)在放射性肺损伤中起到重要作用[1].乌司他丁(天普洛安)是一种广谱的蛋白酶抑制剂,能够抑制多种细胞因子及炎症介质,在临床上已经广泛应用于多个领域,我们通过动物实验建立放射性大鼠肺损伤模型,发现乌司他丁能有效降低TGFβ1水平,为治疗放射性肺损伤提供了一种新的方法.1材料和方法1.1材料健康雌性SD大鼠60只,体质量(180±20)g,购于第四军医大

2、学实验动物中心;采用德国西门子公司的6MVX直线加速器;图像采集使用OLYMPUSBX51型号显微镜系统;图像分析使用美国MediaCyberics公司的ImageProPlus6.0图像分析软件;酶标仪使用美国BioRad公司生产的BioRad450型;TGFβ1大鼠酶联免疫吸附测定试剂盒及兔抗大鼠TGFβ1mAb试剂盒购于美国SantaCruz公司;ABC免疫组化试剂盒购于美国Sigma公司;乌司他丁(天普洛安)购于广东天普生化医药股份有限公司.1.2方法1.2.1动物模型制备与实验分组60只雌性

3、SD大鼠随机分为3组(每组20只):正常对照组(C组)、单纯照射组(R组)、乌司他丁治疗组(U组).后两组动物经戊巴比妥40mg/kg腹腔麻醉后.freelm厚蜡块以调整剂量分布,铅屏蔽头部与腹部行直线加速器全胸部照射,单次剂量为20Gy(2Gy/min),距离1m,面积4.5cm×4.5cm.U组于照射当日开始以乌司他丁10000U/kg尾静脉注射,而后每天相同剂量静注,共计7d;C,R组同期尾静脉静注同等体积的生理盐水.1.2.2标本采集于照射后7,15,30,60d每组取5只麻醉后,直接从心脏采血2mL,立刻

4、置入含EDTA的抗凝管中混匀,静置30min后以1500r/min离心15min,留取血浆冻存于-70℃;将大鼠右侧肺门结扎,气管插管,.freelL,保留3min后吸出,反复3次,收集支气管肺泡灌洗液BALF,将BALF4℃离心(3000r/min,4min),吸取上清液冻存于-70℃待测;取右下肺以40g/L多聚甲醛固定,常规石蜡包埋、切片.1.2.3肺组织病理学观察各组大鼠肺组织石蜡切片分别行苏木素伊红(HE)染色观察动物肺组织一般病理学改变,每例实验动物选5张切片,运用OLYMPUSBX51显微图像采集

5、系统100倍下每张切片随机选取10个高倍镜视野观察.ImageProPlus6.0(美国MediaCyberics公司)医学图像分析软件进行计算机图像分析,测定肺间质面密度等;同法用Masson染色观察肺组织胶原蛋白沉积情况.1.2.4免疫组化检测TGFβ1的表达取包埋好切片,按试剂盒说明书步骤进行,兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体稀释度为(1∶100),DAB显色,苏木素轻度复染核,光镜下观察.结果以胞质内可见棕红色颗粒者为阳性,以肺泡实质TGFβ1阳性表达面积作为检测TGFβ1表达的半定量指标.1.2.5

6、酶联免疫吸附(ELISA)方法测定TGFβ1的含量取冻存的血浆及肺泡灌洗液,按照试剂盒说明书步骤严格操作.统计学处理:采用SPSS12.0统计软件进行数据分析,正态分布数据以x±s表示,行单因素方差分析及SNKq检验,P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1肺组织病理学变化HE染色显示C组肺组织结构正常;R组7d肺泡壁增厚,肺毛细血管扩张、充血,少量炎细胞浸润,15d出现局限性炎症浸润灶,30,60d肺水肿明显,局限性肺实变;U组各期炎症、水肿均较R组减轻(图1).R组在照射后30,60d肺间质面密度逐渐增大

7、(P0.01),而U组与同期R组比较明显减小(P0.01,表1).Masson染色显示C组可见淡蓝色的基质胶原较少,主要分布在气道及血管外膜.R组7,15d基质胶原与C组相比较稍有增加,30d以后血管外膜及肺泡间隔胶原纤维增多,U组与R组同期相比胶原纤维减少(图2).表1不同组间放射性肺损伤肺间质面密度的变化2.2TGFβ1免疫组化检测C组肺组织TGFβ1在肺泡间隔、细支气管平滑肌、血管平滑肌、血管内皮、血管周围仅弱表达或不表达,阳性面积少;R组在30,60d时上述部位明显比C组表达增强,并出现肺泡上皮细胞、肺

8、间质巨噬细胞强阳性表达,阳性面积随之明显增加(P0.01),U组表达部位与C组相似,阳性面积较R组明显减少(P0.01,图3,表2).A:正常对照组;B:单纯照射组;C:乌司他丁治疗组.图3各组大鼠肺组织TGFβ1免疫组化染色(30d)×400表2大鼠肺组织TGFβ1免疫组化阳性面积变化(n=5,μm2,x±s)组别〖〗照射后(d)7〖〗15〖〗30〖〗

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