高氧诱导新生鼠急性肺损伤模型的制备及其机制探讨

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1、高氧诱导新生鼠急性肺损伤模型的制备及其机制探讨作者：潘佳容　肖志辉　张晨美【摘要】建立新生儿高氧急性肺损伤的动物模型,并探讨其发病机制。方法　采用新生Sprague-Daalanimalmodelofoxygen－inducedacutelunginjury(ALI)inneonate，andtostudythepossibleunderlyingmechanism.Methods　Persistenceexposureof90％～95％oxygenresultinginALIalondialdehyde(MDA)，superoxidedismutase(SOD)andT

2、NF-αinbronchoalveolarlavagefluid(BALF)inedandtheintensionofnuclearfactor-κB(NF-κB)expressioninratlungethodofimmunohistochemistry，andlunghistopathologicalchangesinedinhyperoxicgroupandcontrolgroup.Results　After3days，pareda，inflammatoryinfiltration.After7days，continuousincreaseintheconcentr

3、ationofMDA，TNF-αinBALFandtheintensionofNF-κBinratlungandcontinuousdecreaseintheactivityofSODinBALForeseverechangesinhyperoxicgroup.　Conclusions　Anoptimalanimalmodelofoxygen－inducedALIinneonateechanismsofimbalanceofoxidant/antioxidantandinflammationmayplayimportantrolesinthedevelopmentof早在

4、1967年North×25cm×35cm的有机玻璃容器，顶部一进气孔（直径0.5cm），侧面有等大的排气孔，进气孔持续通入纯氧，测氧仪（由浙江利达仪器厂生产）连续监测箱内氧浓度，使氧浓度维持在90％～95％。容器内置有饲料、水、钠石灰250g（由上海陆都化学试剂厂生产）以及垫料。环境温度22～26℃，相对湿度保持60%～70%。1.3　实验动物分组及处理　生后3d新生SD大鼠48只编号、称重后随机分为对照组和高氧组，每组24只。高氧组新生鼠置于上述高氧环境。对照组新生鼠则置于同一室内,接受常压空气。高氧组每天开箱两次(更换垫料、钠石灰、水及饲料，并与空气组互换母鼠以避免母

5、鼠因氧中毒致护理能力下降，两次开箱总时间不超过1h)。1.4　实验指标检测1.4.1　支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluidBALF)中指标检测实验3d和7d后,腹腔注射戊巴比妥钠(90mg/kg)麻醉后放血处死。经气管插管并向导管内注入4C0.9％氯化钠注射液灌洗3次,将灌洗液于离心半径8cm,2500r/min离心10min,取上清液备测丙二醛（malondialdehyde，MDA）、总超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）活性，以及(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)（ELISA法）。

6、MDA试剂盒、SOD试剂盒（由南京建成生物工程研究所生产），TNF-αELISA试剂盒（由上海晶美生物工程有限公司生产）。1.4.2　肺组织病理切片　将未灌洗的动物麻醉处死,打开胸腔,取左肺迅速浸泡于10％中性福尔马林液中,石蜡包埋、切片,HE染色,光镜观察。1.4.3　肺组织核因子－κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）检测采用S-P法，兔抗大鼠NF-κB(p65)抗体（由武汉博士德生物工程有限公司生产）、SP超敏试剂盒（由福州迈新生物技术开发有限公司生产）。细胞核和(或)胞浆呈棕色即阳性细胞。400倍物镜下每张切片随机选5个视野,用图像分析系统（由德国L

7、EiCA公司生产，型号Q550CDA、总SOD、TNF-a及肺组织NF-κB染色强度变化见表1由表1可见，高氧暴露3d，BALF中MDA、总SOD、TNF-a及肺组织NF-κB染色强，高氧组与对照组比较，差异均有统计学意义(t分别＝7.07、4.56、6.45、50.08，P均＜0.05)；7d时上述指标高氧组与对照组比较，差异均有统计学意义(t分别＝9.70、7.15、7.20、98.05，P均＜0.05)。2.2　病理表现见封二图4～6　高氧组3d时见小血管扩张、充血和肺泡内少量出血及炎性细胞浸润;7d时高氧组毛细血管扩张