微生物考题整理（实验）

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1、微生物考题整理这份是11级考试的题，但是咱今年的操作题老师说是咱土壤细菌的“未知菌种的染色”，但是还是希望大家能把咱做过的实验都看一遍,有个保障！Fighting!1•实验考试占到总成绩的60%,包括笔试和操作两部分。笔试分填空和简答两种题型，每种题型每人从十道题中各抽一道，向老师口头解答;操作题由学姐看着完成。2•操作题主要考点：（1）干湿热灭菌的包扎（培养川L、试管、三角瓶）（2）制片（自己挑选菌种，E和B大家都知道，S开头的是枯草芽抱杆菌）好像不用染色，但要口头向学姐叙述操作；（3）平板划线（不必分四个区，直

2、接划）、斜面划线（不必按书上说的先画一道直线，直接由下向上涂Z字形即可）、平板涂布（用玻璃涂棒）；⑷移液枪的使用；（5）火焰灼烧灭菌法（见P10操作规范，先烧环，再竖着灼烧，再横着灼烧总,共至少灼烧三次。）（6）倒平板先把塞子推进去，带塞在火焰上灼烧灭菌；手指把塞子夹起，右手握住三角瓶底，左手在火焰旁开培养皿盖一条缝，倒入3.简答题10分至少答出三点才能得满分，所以把想到的都尽量答出來。（1）超净台紫外灭菌的注意事项：工作吋•定要关闭紫外线灯；玻璃门不可打开过大;工作吋打开风机。（2）干热灭菌注意事项：干热灭菌完毕

3、后，等箱内温度降至70度以下时才能开启柜门取出物品，以防炸裂；物品不要摆的太挤，以免妨碍空气流通；灭菌物品不要接触电热干燥箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火；电热观察窗的玻璃温度很高，不要用乎接触，易烫伤。（3）你涂的平板后来长出的菌落连到一起成了一片，分析一下原因？a滴上菌液后放置吋间过长，水分蒸发后，不容易涂开；b涂布时没涂均匀；c所接的菌液浓度过高，或因为没摇匀蘸取的菌液浓度过高。(4)油镜观察找不到物像分析原因？a光线过明或过暗；b上升镜筒过快，一闪而过没注意到；c油镜没接触到香柏油。(5)使用完油镜擦净步骤

4、:a用擦镜纸擦；b用擦镜纸醮取乙醇乙醍混合液擦；c再用擦镜纸擦干净。(6)用血球计数板计数时出现误差的原因？a滴样前未充分摇匀菌液；b滴液时没有让其沿缝隙靠毛细渗透作用进入计数室，导致菌液过多把盖玻片顶起，改变了计数室的容积;c加样后，没有静置5分钟，使细胞或抱子自然沉降；d加样时计数室里冇气泡产生。(7)常用碱性染料进行染色的原因：微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染色部分带止电荷，很容易与细胞结合使其着色。(8)平板菌落计数法的优缺点：缺点是操作繁琐，需耍培养•段时间才能获得，测定结

5、果易受多种因素的影响；优点是能直接反映样品中活细胞的数量。(9)芽砲染色的注意事项：不老不小，不沸不干，不长不短。a选用适当菌龄的菌种，幼龄未形成芽葩，老龄芽葩囊破裂b加热染色时耍保持染液微冒蒸汽，沸腾会使菌体或芽抱囊破裂，加热不够芽砲难以着色。C脱色要等到玻片冷却后进行，骤冷易使玻片破裂，冲洗时间不能过长或过短。(10)芽砲染色后观察不到芽抱的原因有哪些？a菌龄不适宜；b加热过度使之破裂加热不够没染上色;c脱色时间过长洗掉了(11)自己制的细菌涂片镜下观察不到菌的原因?a没固定好;b挑取的菌量太少，或菌液过稀;c

6、染色不充分或被脱色。(可能述有其他原因大家自己总结哈)(12)革兰氏染色原理：阳性菌和阴性菌细胞壁结构和组成的差异。草酸镀结晶紫初染，所有菌都染上;碘液媒染，碘与结晶紫结合形成碘•结晶紫复合物，增强了染料在菌体屮的滞留能力。95%乙醇脱色时效果不同。阳性菌肽聚糖含量高，脂质含量低，与复合物结合程度高，且其网孔结构有滞留作用，乙醇脱色使网孔收缩，滞留更强，故而显蓝紫色；阴性菌壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄易洗脱，且脂质含量高易溶于乙醇，洗脱为无色。复染后变为红色。(4)探究抗生素对微生物生长影响时，抗生素不可与培养基

7、一起灭菌：因为高温会破坏抗生素的抑(杀)菌活性。要分开配置抗生素溶液和培养基，抗生素可用过滤膜过滤除菌，培养基高压蒸汽灭菌后晾至50度到60度才能加入抗生素。(5)平板涂布注意事项：a涂前摇匀；b菌液密度适宜；c涂布要均匀；d不要用力过大把培养基戳破;e滴上菌液后等待时间不宜过长。(15)血球计数板计数规则：有25*16和16*25两种规格。每边一个大方格，每个乂分9个大方格，屮间的格为计数室,面积数室容积0.伽代10饰1_•计数五个中方格的总数，两个计数室求平均值为A,菌液稀释倍数为B,计算公式；ImL菌液中的总

8、Ii数二A/5*25*103456*B(16)稀释涂布平板计数原则：见P207-208(17)芽砲染色为什么要加热？芽他壁厚，通透性并难染色，但一旦着色难以脱色。先用着色能力强的染料加热条件下加热，染料既进入菌体乂进入芽鞄，水洗时，菌体脱色，芽他保留。4•填空题(一空2分)(1)干热灭菌温度160~170_度,最高不超过180度,否则会烧焦，其至燃烧。时间1