细胞培养从头学75608

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1、常用设备准备空的设备：单蒸憎水蒸镭器、双蒸镭水蒸懈器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（・80°C）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、C02孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4°

2、C冰箱（放置serum和培养用液）。无菌操作无菌室的灭菌：1、定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦弑。2、CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸，再用紫外灯照射3、实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20・30分钟4、实验后灭菌：用75%酒精（3%。新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。实验人员的无菌准备：1、肥皂洗手。2、穿好隔离衣、带好隔

3、离帽、口罩、放好拖鞋3、用75%酒精棉球擦净双手。无菌操作的演示：1、凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均耍用75%酒精擦拭瓶子的外表面2、靠近酒精灯火焰操作。3、器皿使用前必须过火灭菌4、继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用吋仍要过火。5、各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。6、吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1、自来水刷洗，除去灰尘。2、烘干、泡盐酸：烤箱中

4、烘干，然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、碑等物。3、刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。4、泡酸、清洗：用清洁液（重侪酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸蚀水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸徭水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。5、烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6、高压消毒：包装好的器1111装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，

5、维持20-30分钟。7、高压消毒后烘干二、I日的玻璃器皿的洗消：1、刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入來苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过來苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。2、泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸懈水冲洗3次。3、烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。4、高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随

6、着温度的上升安全阀冒出蒸气当蒸气成直线冒出3・5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）5、烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消：金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75%酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸僧水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。橡胶和塑料：橡胶和制品通常处理方法是：先用

7、洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸锚水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：1、针式滤器帽不能泡酸液，用NaOH泡6-12小时，或者煮沸20分钟，在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。2、胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟），白来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸憎水，三蒸水洗净，烘

8、干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。3、胶帽，离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6J2小时（切记时间不能过长），自來水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸懈水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。4、胶头可用75%酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。5、塑料培养瓶，培养板，冻存管：6、其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70%酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露在