临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第二十四章_支原体及检验

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1、第二十四章支原体及检验本章内容概述肺炎支原体解脲脲原体人型支原体穿通支原体生物学特性微生物检验临床意义概述·支原体是一类无细胞壁、呈高度多形态性，能通过除菌滤器，在人工培养基上能生长繁殖的最小原核型微生物。·支原体科分为支原体和脲原体两个属。在支原体属中，对人有致病性的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体；而脲原体属中，对人致病的有解脲脲原体。生物学特性-·形态与结构个体微小，大小约0.2～0.3μm，呈高度多形态。G，但不易着色，常用吉姆萨染色。·无细胞壁仅有细胞膜是与细菌区别的主要特点。支原体的细胞膜胆固醇类含量高。凡能作用于胆固醇的物两性霉素B、皂素及洋地黄苷均可破

2、坏细胞膜致其死亡。·抗原细胞膜外层蛋白质是主要的特异性抗原，具有免疫源性。·抵抗力不耐热，45℃经15～30分钟或55℃经5～15分钟即告死亡。耐冷，不耐干燥。对一些化学物质敏感，容易被重金属盐类、苯酚、来苏儿等化学消毒剂灭活。对抑制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。因无细胞壁，对渗透压敏感。对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等不敏感。·培养特性大多数需氧或兼性厌氧，通常在含95%N2、5%CO2的微需氧环境中生长良好。营养要求较高：需在含牛心浸液、马血清与酵母浸液等成分的培养基上生长。菌落特征与细菌L型菌落极相似，37℃培养3～10d菌落呈“荷包蛋”样。两

3、者不同点在于细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下易返祖为原菌，而支原体不出现返祖现象。·生化反应常以发酵葡萄糖、水解精氨酸和尿素等生物学特性不同，作为初步鉴别支原体的依据。四氮唑还原能力、亚甲蓝抑制、溶解红细胞、吸附红细胞等生物学特性不同，作为支原体进一步鉴别的依据。微生物检验由于支原体无固定形态，染色结果不易与标本中的组织碎片等杂物区别，故取患者标本直接镜检对各种支原体的诊断意义不大。微生物检验方法主要靠分离培养与血清学检验。肺炎支原体——生物学特性·形态与结构形态：呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。大小：个体微小。-染色：G，不易着色，吉姆萨染色呈淡紫色。特殊：无细胞壁

4、是与细菌区别的主要特点。第1页共5页·培养特性营养要求：较高。气体环境：需氧或兼性厌氧。通常在含95%N2、5%CO2的微需氧环境中生长良好。温度酸碱：最适pH7.6～8.0。菌落特征：常以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母浸液制成液体或固体培养基。微需氧培养，初次分离需1～2周才长菌落。菌落常不出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌落开始典型。·抗原细胞膜外层蛋白质是主要的特异性抗原。可将支原体分成若干血清型。·抵抗力耐冷，-70℃或液氮中可长期冻存。不耐干燥。对渗透压敏感，容易被消毒剂灭活。对作用于细胞壁的抗生素，如青霉素、头孢菌素等不敏感，对作用于核蛋白体，抑制或

5、影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。肺炎支原体——微生物检验·标本采集：采集咽分泌物、痰、支气管分泌物、胸水等。·形态学检查：意义不大。·分离培养生化反应：（1）分解葡萄糖产酸不产气。（2）氯化三苯基四氮唑（TTC）还原试验：使无色TTC还原为粉红色。（3）生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）。（4）红细胞吸附试验：肺炎支原体的菌落能发生红细胞吸附。·血清学试验特异性血清学试验：ELISA技术。补体结合试验：诊断肺炎支原体常用的血清学方法。间接血细胞凝集试验：主要检测IgM抗体。第2页共5页非特异性血清学试验：冷凝集试验（一般血清滴度≥1:64即为阳性，病程中

6、双份血清至少效价有4倍增长，近期感染可能性越大）。·核酸检测：PCR试验快速检测。肺炎支原体——致病性及临床意义肺炎支原体可从口腔、呼吸道分离到，主要通过飞沫传播，是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。儿童和青年易感，首先引起上呼吸道感染，然后下行引起肺炎、支气管炎。解脲脲原体——生物学特性·形态与结构形态：呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。大小：个体微小。-染色：G，不易着色，吉姆萨染色呈紫蓝色。特殊：无细胞壁是与细菌区别的主要特点。·培养特性营养要求：较高。气体环境：需氧或兼性厌氧。通常在微需氧环境中生长良好。温度酸碱：最适pH为5.5～6.5。菌落特征：生长较快

7、。·含酚红、尿素及血清的液体培养基内：微需氧环境中37℃孵育，1～2d内即可出现生长现象。再转种固体培养基48h可形成“荷包蛋”样菌落。解脲脲原体——微生物检验·标本采集：采集如尿液、前列腺液、精液、阴道分泌物等。·形态学检查：意义不大。·分离培养生化反应：（1）不能利用葡萄糖和精氨酸，但可利用尿素作为能源，分解尿素产碱。（2）生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）。·血清学试验：意义不大。·核酸检测：快速、敏感、稳定、可靠。解脲脲原体——致病性及临床意义·解脲脲原体是人类生殖道最常