阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者CD34CD59细胞体外扩增及裸鼠移植的研究

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时间:2019-05-15

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1、中国协和医科大学博I研f究生学位沦文f中文摘要中文摘要阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性慢性溶血性疾病,以反复的血管内溶血、慢性贫血及血栓形成为主要临床特征。PNH的一个显著特点是患者体内异常克隆与正常造血细胞K期共存,但机制并不十分清楚。另外,PNH目前仍无有效的根治方法。PNH正常克隆是否真正正常?能否在自体干细胞移植时重建造血?本文针对这些问题进行了研究,其结果将为开展新的治疗(自体十细胞移植)提供实验依据。本文旨先研究了利用细胞因子组合进行正常人骨髓造血干/祖细胞扩增,将扩增后的细胞移植给接受亚致死剂量照射的裸鼠,

2、观察移植后裸鼠体内人造血干细胞的表达以及多向分化的情况,建立可靠的移植模型。在此基础上,我们将PNH患者体内J卜常造m干/祖细胞(CD34+CD59+)分离出来,进行体外扩增后输注给接受亚致死剂量照射的BALB/c裸鼠来研究其增殖能力以及重建造血的情况,并且将PNH患者CD34+CD59+细胞与『F常人CD34+细胞在裸鼠体内表达情况进行比较研究,以期为临床应用提供实验依据。本研究首先利用免疫磁珠方法分选山『F常人CD34+细胞,并在细胞冈子组合SCF+IL-3+IL_6+TPO+EPo+Fu二3作用卜进行体外扩增,最适宜扩增时间为第7天

3、,在此条件F扩增倍数为57.38±2.50倍。扩增后的CD34+细胞仍保持较好的形成集落形成单位(CFU)的能力,但向多系分化的潜能有所下降。以BALB/c裸鼠为移植模型进行正常人造血干/祖细胞的输注,经腹腔或鼠尾输注扩增后第7天含1X105的CD34+细胞,发现移植后68周的裸鼠体内用流式细胞仪可榆测到人源性CD45+细胞,应用PCR方法可以检测到人特异性Cart.1基凶及Alu序列的表达,外周血常规白细胞和血小板较阴性对照均有明显的升高。我们发现通过静脉输注CD34+细胞的裸鼠体内骨髓及外周Iff【巾CD45+细胞的表达高于腹腔输汴组

4、,而脾脏L}JCD45+细胞的比例低于腹腔输注组,但统计学均未有显著性差异。表明人骨髓来源的造血卜细胞也能顺利地山腹腔归巢到骨髓造血组织,并重建骨髓造血,且简便易行,操作准确。我们进一步利用免疫磁珠双阳性分选法分选出PNH患者CD34+CD59+细胞,中国西和医科人学博-t:形F究生学位论文【巾文摘要1将其与正常人CD34+细胞的扩增过程以及扩增后的干/祖细胞在裸鼠体内的表达情况进行比较,结果显示:(1)PNH患者的CD34+CD59+细胞可以在裸鼠体内成功存活。(2)接受PNH患者CD34+CD59+细胞移植后的裸鼠血象并不能完全恢复,

5、其外周血常规中血红蛋白和血小板数值明显低于_F常人CD34+细胞组。(3)PNH患者的CD34+CD59+细胞在生存、增殖、扩增能力上弱于『F常人CD34+细胞,输注给裸鼠后,虽然其CD45+细胞的比例低丁正常人CD34+组,但两者无统计学差异,说明PNH患者CD34+CD59+细胞仍具有同『F常人CD34+细胞基本相同的特性。中围协和医科大学博一}:研究生学位论文I英文摘要】AbstractParoxysmalNocturnalHemoglobinuria(PNH)isanacquiredhemolyticanemia.Themainm

6、anifestationsarerecurrentepisodesofhemoglobinuria,chronicanemiaandthrombosis.ThefundamentalnatureofthediseaseiStheCO.existenceofabnonnalcloneswithnormalclonesinpatientsbonemarrow,butthemechanismforthishasnotbeenfullyelucidated.ThecurrenttreatmentforPNHisfarfromeffective.E

7、xceptallogeneicbonemarrowtransplantation,themajorclinicaleffortsaretowardtocontrollingcomplicationsratherthaninterruptingthediseaseprocess.Thisresearchprojectisaimedtoapplynewtreatmentmethodsforthisdiseaseincludingautogeneicstemcelltransplantation.WegenerateHematopoieticS

8、temCells(HSC)exvivocombiningwithdifferenthematopoieticgrowthfactorsandtransplantthesecellsintosu

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