氨基肽酶抑制剂乌苯美司诱导人骨髓瘤细胞凋亡及其机制的研究

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时间:2019-05-15

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1、·中文论著摘要·氨基肽酶抑制剂乌苯美司诱导人骨髓瘤细胞凋亡及其机制的研究目的探讨氨基肽酶N抑制剂(CDl3抑制剂)乌苯美司在体外对人骨髓瘤细胞XG.1生长抑制、线粒体膜电位以及诱导人骨简瘤细胞凋亡的作用及其作用机制。方法常规细胞培养,取对数生长期人骨髓瘤XG-1细胞,制成细胞悬液,按1.5x103/孔的密度接种,培养24h细胞完全爬片后,乌本美司组加入500,1000p,g/ml的乌本美司,空白对照组加入1640培养液。乌本美司作用24,48h后,用光学显微镜观察细胞形态结构的改变;用Rhodaminel23分别标记活细胞及经药物作用24h,48

2、h后的细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化:通过DNA片段原位末端标记法(n州EL)检测凋亡细胞;SABC细胞免疫法检测细胞凋亡相关蛋白,检测细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶3(caspase.3)及Bcl.2的表达,计算其分别的阳性表达并计算细胞凋亡率,统计学分析细胞阳性率与细胞凋亡率之间的相关性;对实验数据进行统计分析。结果细胞凋亡形态:经乌苯美司1000p,g/ml作用48h后的人骨髓瘤XG一1细胞可见细胞体积缩小,核质固缩,核膜核仁碎裂、溶解,胞质浓缩,出现典型的凋亡小体。镜下空白对照组人骨髓瘤XG.1细胞呈圆或椭圆形,并呈聚集状态生长,分布

3、均匀,细胞膜完整、胞质透明清亮、细胞核一个或多个,形状大而圆,细胞生长状态良好;细胞免疫组化显示人骨髓瘤XG.1细胞表面呈黄染,证实人骨髓瘤XG.1细胞表面有大量CDl3存在;细胞凋亡及形态观察:500,1000p,g/ml乌苯美司作用24h后细胞凋亡率分别为(23.57+5.41)%,(58.35+8.45)%;在24"--48h过程中,凋亡的细胞逐渐坏死,空白对照组24,48h后细胞凋亡率均为1%。线粒体跨膜电位的变化:Rhodaminel23染色结果显示,10001.tg/ml乌苯美司作用24h时线粒体膜电位荧光强度的峰值在100~1000

4、,平均荧光强度明显低于空白对照组(135.53±15.09,223.37±13.82,P<0.01);作用48h时线粒体膜电位荧光强度的峰值位于i0,-.100,平均荧光强度显著低于空白对照组(35.81±5.93,221.36±24.79,P<0.01);凋亡相关蛋白的表达:500,1000“g/ml乌苯美司作用骨髓瘤细胞48h后,凋亡相关蛋I刍caspase.3表达明显增高、Bcl.2表达则降低,并分别与凋亡率呈正相关与负相关;细胞DNA损伤:1000I.tg/ml乌苯美司作用24h后,TUNEL法检测细胞凋亡可见细胞核中出现棕黄色颗粒,即为

5、DNA受损标志。结论乌苯美司在体外条下能够诱导人骨髓瘤XG.1细胞的凋亡,其诱导凋亡的机制可能是通过诱导细胞发生DNA损伤,增加凋亡相关蛋I刍caspase.3的含量、降低细胞凋亡相关蛋白Bcl.2的含量,从而干预线粒体跨膜电位实现细胞凋亡。关键词骨髓瘤XG.1细胞乌苯美司DNA损伤线粒体膜电位凋亡相关蛋白百士欣2·英文论著摘要·RoleofAminopeptidaseinhibitorUbenimexintheInductionofApoptosisofhumanmyelomacellLineobjectiveThecytokineswhich

6、existinthecellsurfaceinvolvedincellcommunication,proliferation,migration,differentiationandotherphysiologicalprocessesinthebody.Ithasacomplexroleinbiologicalcontr01.Itisdiscussedaminopeptidase-NinhibitorUbenimexinvitroonhuman’Smyelomacellgrowth,mitochondrialmembranepotentiala

7、ndinductionofapoptosisanditsmechanism.MethodsTheexperimentsin2007--12/2009--2hasbeenfinishedattheCentralLaboratoryofChinaMedicalUniversity.ExperimentalMaterials:HumanmyelomacellXG一1ispreservedbytheChineseMedicalHematologists.UbenimexisdonatedbyZhejiangPharmaceuticalCo.,Ltd.(k

8、y—ub一20050903).ExperimentalMethods:Getthelogarithmicphaseofmyelomace

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