必需氨基酸浓度对奶牛乳腺酪蛋白αS1基因表达的影响

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1、浙江大学硕士学位论文必需氨基酸浓度对奶牛乳腺酪蛋白α<,S1>基因表达的影响姓名：来金良申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：吴跃明;刘建新200605012006浙江大学硕士学位论文图表一览表l牛奶中主要蛋白质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4表2主要乳源生物活性肽⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5表3冷冻保护液的组成和编号⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17表4冷冻程序设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18表5冷冻保护液对乳腺组织酶活及基因组DNA降解的影响⋯20表6冷冻程序对乳腺

2、组织酶活及基因组DNA降解的影响⋯⋯2l图1牛酪蛋白屹和p部分序列同源性比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO图2乳蛋白基因启动子的CoREs⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11图3冷冻保护液对乳腺基因组DNA降解影响的电泳图谱⋯⋯20图4冷冻程序对乳腺基因组DNA降解影响的电泳图谱⋯⋯⋯．2l图6Lys浓度对酪蛋白asl基因表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27图7Thr浓度对酪蛋白％l基因表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28图8Phe浓度对酪蛋白％1基因表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292006浙江大学硕士学位论文缩略词20∞浙江大学硕士学

3、位论文致谢’本论文是在导师吴跃明教授和刘建新教授的悉心指导和亲切关怀下完成的。两位导师在论文选题、试验设计和论文撰写过程中给予了精心的指导和帮助。值此之际，向两位恩师表示由衷的感谢。三年来，导师渊博深厚的学识、严谨求实的治学态度、勤奋忘我的工作精神和谦和正直的品格都深深地影响着我，使学生受益匪浅，终生难忘。在课题实施过程中，张才乔教授在组织培养试验方面、方维焕教授在冷冻保存试验方面给予了热情指导；叶均安老师在试验设计方面提出了许多宝贵的意见；特别感谢吴慧慧师姐和杨金勇同学引领我进入这一研究领域，并在试验过程

4、中给予了无私的帮助，在此表示衷心的谢意!此外，在论文完成过程中得到王佳垄、汪海峰、李菊娣、刘晓晖、李瑞丽、布网良、李海庆等众多师兄弟和师姐妹的有益指导和帮助，真诚的感谢你们!此外，还要感谢室友付石军和李建新三年来的关心和支持。李进军、陈伟健、王狲、杨金勇是我的知己。三年来，我们朝夕相处，亲如兄弟；是快乐一起分享，是痛苦一起分担；陪伴我度过了三年的风风雨雨。带给了我无穷的快乐，留下了最难忘的记忆。衷心祝愿你们一切都好!向参加本论文评阅和答辩的全体专家致以诚挚的谢意!最后，感谢父母多年的养育之思，抚育之情，感谢

5、弟弟给我的开心与快乐!本研究获得浙江省自然科学基金(Z305036)的资助，特此表示感谢!来金良于浙大华家池2006年5月2006浙江大学硕士学位论文摘要本文研究了冷冻保护液组成和冷冻程序对冻存奶牛乳腺组织活力的影响，并通过乳腺组织体外培养模型，研究了培养体系中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸浓度对奶牛乳腺酪蛋白‰l基园表达的影响。试验一冷冻保护液组成试验：试验按照3x3两因素试验设计进行，因素一为冷冻保护液中二甲基亚砜浓度，设计为．1．0、1．5和2．0mol／L三个水平，每个水平3个重复；因素二为冷冻保

6、护液中蔗糖浓度，设计为0．t、0．2和0．3mol／L三个水平，每个水平3个重复。结果显示，用含二甲基亚砜2．0mol／L、蔗糖O．1mol／L的冷冻保护液保存的乳腺组织其琥珀酸脱氢酶活力显著高于其他冷冻保护液(P

7、入-20'c)和V2(将冷冻管于4'12平衡30min，用一层棉花包裹冷冻管放入泡沫盒中，放入-20"C)，每个处理3个重复。因素二为-20℃保存时间，设计为2、3、4h，每个处理3个重复。结果显示，采用降温速率V2和-20"C保存4h的冷冻程序保存的乳腺组织，其琥珀酸脱氢酶活力显著高于其他冷冻程序口

8、别为乳腺组织培养体系中赖氨酸(Lys)、蛋氨酸叫ct)、苏氨酸ffhr)和苯丙氨酸(Phe)浓度，每个氨基酸为一个因素，共有四个试验。乳腺组织培养液中Lys、Met、Thr和Phe浓度分别为170、60、103和105rtg／ml。依次分别调整乳腺组织培养液中Lys、Met、伢和Phe浓度，设计试验组必需氨基酸浓度，Lys浓度设为120、145、170、195、220、245、270p．g／ml；Met浓度设为5