白细胞介素21增强CIK细胞抗白血病作用的研究

《白细胞介素21增强CIK细胞抗白血病作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R551．3密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602622学科门类：医学又泽篑毳寸鼻垮警l蘸鹣0i瓣MEDICA瓢0鞘l鼙ERSl麓一硕士学位论文M【ASTER’SDISSERTATION论文题目：白细胞介素21增强CIK细胞抗白血病作用的研究TITLEEnhancedeffectsofinterleukin21onanti-leukemicactivityofcytokineinducedkillercells．一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：赵楠指导教师：赵明峰教

2、授导师组成员：李玉明邓琦天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明

3、IUlliUIIIIIIIIIIIIIIIY2396444本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：鳞日期：’矽哆年r月≥日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学

4、校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：l匦互啤L日期：’矽J弓年岁月≥同导师签名：肄日期：≯哆年二月≯日大津医科人学硕士学位沦文中文摘要目的：研究白细胞介素21(IL．21)对外周血来源CIK细胞(细胞因子诱导杀伤细胞)抗白血病的作用及其作用机制。方法：l、采集分离正常人的外周血单个核细胞，加用

5、细胞因子诱导培养CIK细胞。2、构建表达IL．21基因的慢病毒载体，感染CIK细胞并鉴定。3、MTT法检测外源及内源IL．21作用下CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用。4、流式细胞仪检测外源及内源IL．21作用下CIK细胞免疫表型及其表面IL．21受体(IL．21R)、FasL、细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达。5、半定量RT-PCR法检测外源及内源IL．21作用下CIK细胞IFN吼TNF．O【、TNF—B、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、FasL和NKG2DmRNA的表达。6、酶联免疫法检测外源及内源IL．21作

6、用下CIK细胞培养上清中IFN．y和TNF．Q的表达。7、Westernblot法检测外源IL．21作用下CIK细胞JAK．STAT信号途径的变化。结果：l、在外源IL．21作用下：(1)总的细胞数量的扩增无明显变化，CIK细胞的产生由(17．5+4．7)％升至(26．5±2．1)％(p<0．05)。(2)CIK细胞对K562细胞的杀伤作用由(22．8±2．8)％升至(44．64-8．3)％。(p

7、0．2358升至O．7786_+0．2493(p

8、KG2DmRNA的表达与对照相比差异无统计学意义。(5)对mRNA表达有差异的指标进一步行蛋白表达的检测发现：CIK细胞表面FasL的表达水平加IL一21组(O．19％)与未加IL．21组(O．04％)有明显差异，CIK细大沣医科人学硕士学位论文胞内穿孔素的表达由35．28％升至53．16％，颗粒酶B的表达由43．16％升至78．82％，培养上清中IFN．g的表达由(25．8±6．1)ng／L升至(56．0-t-2．3)ng／L(庐O．05)，TNF一0【的表达由(5．64±0．61)u∥L升至(15．14±0．93)lag／

9、L(p<0．05)。(6)Westernblot结果显示STATl和STAT5a的表达无明显差异，STAT3和STAT5b的表达增加。2、在内源IL．21作用下：经酶切与测序鉴定，IL．21慢病毒载体构建正确，共转染CIK细胞中有目的基因IL．21的表达。与对照相比：(1)总