牛粪细菌杀线虫活性筛选及挥发性代谢产物的研究

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1、云南大学硕士论文M．S．DISSERTATIONThenematicidalactivityandvolatileorganiccompoundsofbacteriaisolatedfromCOWdungByLUHaoDirectedbyAssoc．Prof．LiGuo—hongYunnanUniversity,Kunming，P．R．ChinaMay,2013资助项目973项目：农作物重要病原线虫生物防控的基础研究，第五课题“新型天然杀线虫活性化合物的发掘及作用机制”(2013CBl27505)云南大学硕士论文扉页：独创性声明IIllllllllllUllrllll

2、lllllfllllllllfllllllfY2378866本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。论文使用和授权说明期：塑坚．至本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版：允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生

3、签名：争鳋导师签名：窒固笙曼日期：垒釜圣：至本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入(3NKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：导师签名：——日期：云南大学硕士论文摘要植物寄生线虫是农业生产中重要的植物病原之一，使作物减产从而给农业生产带来重大损失。目前细菌已广泛的运用于生物防治中，其代谢产物是新兴的天然化合物的重要来源。细菌产生的多种代谢物中，部分化合物具有抗肿瘤、抑菌、杀虫等活性。本研究对牛粪中分离得到的细菌进行了杀

4、线虫活性筛选，部分细菌具有产生挥发性杀线虫活性代谢产物的能力，对这些产生挥发性杀线虫代谢产物的细菌进行了分子生物学水平上的鉴定；利用GCMS对其产生的挥发性有机物进行了鉴定，并测试了其产生的挥发性化合物的杀线虫活性。本文主要研究结果如下：1．对前期分离的224株牛粪细菌进行杀线虫活性筛选，44株细菌发酵液对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)具有致死活性，24h时对秀丽隐杆线虫(Celegans)致死率达到100％的有23株，占细菌总数的10．27％，22株在1h时活性达到90％以上，占细菌总数的9．82％。对22株高活性菌株进行挥发性杀线虫活性

5、筛选，其中19株能产生毒杀秀丽隐杆线虫(Celegans)和南方根结线虫(Meloidogyneincognita)的挥发性代谢产物。2．对22株高活性细菌进行分子生物学鉴定。基于16SrRNA基因序列的鉴定结果表明，这些细菌分别属于粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecal&)、蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)、彭氏变形杆菌(Proteuspenneri)、豪氏变形杆菌(Proteushauseri)、雷氏普罗威登斯菌(Providenciarettgeri)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcussciw。f)、木糖葡萄球菌(Staphyloc

6、occusxylosus)、气生微杆菌(Microbacteriumaerolatum)、甜菜假单胞菌(Pseudomonasbeteli)、烟草节杆菌(Arthrobacternicotianae)、木糖氧化无色杆菌(Achromobacterxylosoxidans)、Wautersiellafalsenii和Pseudochrobactrumsaccharolyticum。系统发育分析表明这些不同分类地位的杀线虫细菌聚类形成三个进化分支。3．利用SPME．GCMS联用法对5株产生杀线虫挥发性代谢产物的细菌进行挥发性产物的鉴定。活性测试结果显示细菌产生的挥发性化合

7、物中，二甲基二硫醚、云南大学硕士论文硫代丁酸甲酯、3．甲基．2．丁烯酸乙酯、苯乙酮、2．壬酮、对甲基苯甲醚和异戊酸丁酯具有杀线虫活性。本论文的创新性体现为：1．首次报道了变形杆菌属(Proteusspp．)、普罗威登斯菌属(Providenciaspp．)、葡萄球菌属(Staphylococcusspp．)、节杆菌属(Arthrobacterspp．)、无色杆菌属(Achromobacterspp．)、Wautersiellaspp．和Pseudochrobactrumspp．具有杀线虫活性。2．首次报道了硫代丁酸甲酯、3．甲基．2．丁烯酸乙酯、对甲