溶血性贫血及再生障碍性贫血患者外周血细胞CD47的表达

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1、中山大学硕士学位论文溶血性贫血及再生障碍性贫血患者外周血细胞CD47的表达姓名：康颖申请学位级别：硕士专业：血液内科学指导教师：尹松梅2003.5.31端敷链爨懿教褥生滞鞲幢贫飙惑嚣终麓癞L缀跑CD47韵袭遮串文摘要溶血性贫矗及再生障褥性贫血患者外周盥细胞CD47的表达专业：擞波内辩学颈士磷究生：壤粳导烬：尹松掺奎强睡薅摘要目潞：，CD47又nq熬舍素蟪荚添囱(IAP)，是一瓣50Kda踌膜糖蛋囱，广泛分京子k冬缓织缀熬，镪摄造盘绸戆等。戳{妻辑究箕渤糍皇簧集审在凡方蕊：CD47是Rh摭艨复食物的缓成都分之一；调节～些整台素鼹活性；调节免疫系统的滔动

2、簿。2000筝，Oldenborg蓄次发裘了CD47终鸯懿绥稳鑫鸯拣态耱新瓣点，认为忑鬻红细胞膜表面存在的CD47，与臣噬细胞表面抑制性受体信号调节蛋白d(SIRPd)结会，产生静裁馁缮母，钛褥缓红爨臆不被吞墩。稳反，CD47缺炎鹣红缨胞被视为“异物”迅速在麟脏被匿曦细胞清滁，从而发擞溶血。猩自身受疫性溶矗链贫斑(AIHA)孛受翻舞靛髂躐於髂皴敏翁缎鼷魏瓣瀵狳每誊蠛逡受CD47～SIRPa调节。因此，我稍设想CD47表达缺失W靛存在于溶缸性餐飙如阵发蚀鼷g鼹性照筑臻皇藤(PNH)、AIHA等，影响红缨臌黪破坏。溶m往贫搬楚由于筑绷胞的破坏过速、过多，

3、越过道血补偿能力时所发生黥～张贫盘。搿分为建天蠖(或遗馋注)秘藤天获褥饿霹犬类；逮可羧获瘸嘏制，分为陵红纲腮肉异常弓i起桷溶盥性贫血釉红纲臌外圆素弓{超的溶髓性贫妞。PNH震蓐天获褥性滚瞧挂贫囊，是一耪逡囊千缨藏宠黪缺黧缝疾瘸。蒸发瘸税翩楚出于A类磷箱酝觏醇聚耱(PIG—A)基因突变簿致耱慧仡磷自警畿飘醇(GPI)合成缺陷，傻GPI锻连载蛋囱缺失，燕娶燕{}体诞甍蛋鑫孛熬衰变黧遽爨予(DAF，CD55)帮簇激巍缝漆擞瓣割耪(耩l魏，CD59)缺乏，斑缩胞时补律敏感性增强两溶瞧。然聪部分PNH患者CD59“比例与溶a癜程度不裰一致，诞鼹溶斑哥戆襻在不依

4、赖於体激潘豹祝铷。PNH可俅有不瓣耩发的全盘缁麓减少，与◇囊意撼硕：b擘位论文荐生障礴往贫蠢(AA)关系密甥，提示PNH与A矗霹憝存在共阉数发瘸因素。AIHA是另～种后天获襻性溶盘往贫血。俸内兔疫调节紊乱，产生自身技体或(和)补体，结合在红细胞膜上，巨噬细胞靠膜上的Fc受体与红细胞吸附的抗体IgG结合而吞噬红细胞。红细胞破坏的速率与红细胞上吸附的IgG数量不＼，．．。一一定威比例，也提示存在其他因素影响溶斑。I，少／在虫滚系统疾瘸中，CD47表达的变化越德探讨，关于CD47在PNH、AA、AIHA患者乡}爝盘缩稳的表达情况，强薷嚣肉岁}瞧未见掇道。本

5、磺究通过采雳滚式缨胞术方法检{燹《PNH、AIHA及AA患者外褥盘细脆表面CD47表遮，并与正常人眈较，初步探讨CD47表达在这些疾瘸中的作用，为临床诊断和治疗提供新思路。／妻验方法f1．瘸倒选择：1)歪常对照缀：15秽l(健廉体检者，年龄20～50岁，牲剐不限)2)PNH缓：4倒、3)AA组：8例}我院及中由～院2002年t0月至2003年4胃就诊恚蠹，4)AIHA组：10例』诊断标准根据张之南童编《赢液瘸诊断及疗效标准》2，观察内容1)红细胞计数，Ham试验，蔗撼水溶血试验，Coombs试验(壹接试验)。2)PIG—A基因突变(PNH缀)。3)井

6、衙巍中经粒绍脆、红缩施CD47及CD59静表达。3，检测方法：1)红细胞计数用电阻法啦细胞分析仪检测；Ham试验、蔗糖水溶血试验用定性法；Coombs试验直接试验检测自身抗体IgG。2)PIG—A基嚣突变用逆转录～多聚酶链及应～异源双链分聿厅(RT—PCR—HA)，璇丙烯酰胺凝胶宅泳银染法检测。外周静脉血4ml肝素抗藏，分离中往粒细胞，提取中性粒细胞总RNA，

7、{溶m性贫珈及弭擞隹审僻性贫血患者外周m剐胞CD47的表达中文摘要逆转秉获霉cDNA，扩增PIG-A基露第2步}麓子，扩增产物交瞧磊复往，聚丙烯酝胺凝胶电泳银染分褥。3)外周皿细胞CD47、C

8、D59的表达用免疫荧光技术在流式细胞仪上检测。外周静脉血lml肝索抗凝，用抗CD47-FITC、抗CD59-PE分别与粒细戆帮绞绥戆维会，在滤式缀照仪上检测。4．统计方法：1)计量资料用均数±标准差(。±S)描述。2)嚣缀资粒静鹭数耽较蔫t一检验，统诗蓑经方差赛缝捡验。3)相关性分析用直线回归和相关分析。4)所有统计分析用SPSSll．0统计软件完成，检验水准为户《O．05为差异有显著性。结果l。2穰PNH戆嚣PIG咄差邋繁2外显子硷浏爨鸯碱基交弄，荬余2饲PIG一直基因第2外殿予检测未发现异常：2．AIHA组外周疯红细胞CD47袭达阳性率((92．

9、37±10．36)％)比设常组((98．46±3。63)％)减低，差异有潋瓣性(辟；O．05)，PNH、AA