大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究(1)

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1、兰州大学硕士学位论文大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究姓名：庄淑波申请学位级别：硕士专业：外科学（整形）指导教师：刘毅20070601兰州人学硕士研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：t舨迩日期：沙7一．舻兰州

2、人学颈士羿f究生学位论文关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰少I'1大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的部分或全部内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：t湘迅导师签名：≥．1莩k隅吲矗炷兰州大学硕士研究

3、生学位论文大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究硕士研究生：庄淑波导师；刘毅(主任医师、教授)指导老师：陈克明(副主任技师)中文摘要目的：1．通过体外分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)，探讨其体外分离、纯化和培养的最佳条件；2．研究大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂分化能力与传代次数的关系：3．通过比较密度梯度离心和贴壁筛选两种方法所获lIsCs的增殖活性和成脂分化能力，探索MSCs体外分离和纯化的较好方法；4．用聚乳酸一聚乙醇酸共聚物(PLGA)生物支架及骨髓间充质干细胞，构建组织工程化脂肪组织。方法：1．分别采用贴壁筛选法

4、和密度梯度离心法分离和纯化骨髓间充质干细胞，并以不同的接种密度、不同的换液时间及不同的血清浓度检测细胞的生长情况，计算细胞的集落形成率、和细胞周期；2．采用全骨髓培养法，分离骨髓间充质干细胞，加含有地塞米松、胰岛素、3一异丁基一l甲基黄嘌呤、吲哚美辛诱导剂的培养液进行诱导，诱导第lO天进行细胞形态学观察和油红0染色鉴定，并进行光密度值测定；3．应用密度梯度离心和贴壁筛选两种方法分离纯化骨髓MSCs，用第三代MSCs进行成脂诱导，以比较两种方法所获MSCs的成脂分化能力；4．将雄性大鼠骨髓间充质干细胞接种于PLGA支架上，向脂肪方向诱导培养1周，扫描电镜

5、观察细胞在支架上的生长及黏附情况，同时，将细胞一支架复合体异体移植，取材观察其成脂情况，并使用原位杂交技术鉴定是否为植入细胞。兰州大学硕士研究生学位论文结果：1．密度梯度离心法所分离细胞纯度高于贴壁筛选法，在以1×10'cells／ml的浓度接种，含12％胎牛血清的娅M培养基中，37"C。5％C02细胞培养箱中细胞生长状况良好，细胞贴壁呈现纤维状生长；2．随着传代次数增加，油红0染色细胞计数值与光密度值均下降：3．密度梯度离心法所获MSCs纯度高，呈纺缍形或小三角形，增殖快，约7～10天融合；而贴壁筛选法分离的原代细胞中红细胞、破骨细胞等杂质细胞较多，

6、增殖速度相对较慢，且经数次传代仍有较多杂质细胞存在，经成脂诱导后，两种方法所获MSCs表现出相似的成脂能力，油红0染色细胞计数值与光密度值比较两组无显著差异(P值>0．05)；4．生物支架上大量成脂分化细胞呈簇状生长，1个月时可见脂肪组织形成，3个月时脂肪组织成熟。结论：1．采用密度梯度离心法体外分离纯化MSCs，在适宜的培养条件下，生长状态良好，增殖速度快；2．大鼠MSCs成脂能力随传代次数增加而降低；3．密度梯度离心法是体外分离和纯化MSCs较好的方法，所获细胞增殖活性高，与贴壁筛选法所获MSCs具有相似的成脂分化能力；4．PLGA生物支架是一种理

7、想的生物可降解支架，骨髓间充质干细胞接种于PLGA生物支架可构建组织工程化脂肪再造的研究。关键词：骨髓问充质干细胞；脂肪细胞；诱导分化：大鼠；细胞培养；组织工程；2兰州大学硕士研究生学位论文Experimentalstudytofabricatetissueen酉neeredadiposewithratmesenchymaistemcellsandpolylactic-cO·glycolicacidAbstractobjective：1．Toexplorethesuitableconditionstoisolate,purificateandcultu

8、reratmesenchymalstemcells(MSCOinvitro，andtoprov