TPR样蛋白生物学功能及作用机制的研究

《TPR样蛋白生物学功能及作用机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文§卫星盘蛋鱼盈丝盈笠旦扭劐鲍盈窒≥是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：．麴丝垒堑堂作者签名：醢逸日期：论文使用授权声明2008—5．20本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存

2、论文。保密的论文在解密后遵守此规定。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：8．5．20南京医科大学硕士学位论文序言不育症是生殖健康的重要内容之一，在我国，不孕不育症的发生率约占育龄夫妇的10％，其中男性因素占不育(孕)夫妇的30％～40％。精子发生障碍为一个重要原因，表现为严重少精，而男性原发性不育症中的30％可能和基因的表达异常或基因突变相关。因此，精子发生调控基因的研究，已成为研究男性不育的热点。另一方面，恶性肿瘤也严重成胁着人们的身体健康，近年来

3、更是呈上升趋势，因此需找恶性肿瘤特异性治疗的突破口是很有必要的。在恶性肿瘤特异性免疫治疗研究中，寻找人类广谱癌基因已成为研究的最佳途径，肿瘤一睾丸无限增殖的共同特征，人们发现其基因的表达具有很高的相似性，尤其启动细胞生长和增生，人们把这类基因命名为肿瘤．睾丸(cancer-testis，CT)基因。肿瘤．睾丸(cancer-testis，CT)基因表达的抗原可诱导机体产生细胞免疫和(或)体液免疫，为肿瘤免疫治疗的研究和应用开辟了新的路径，CT基因的研究目前已成为肿瘤免疫治疗的研究热点。精子发生和肿瘤发生是由一系列基因和蛋白调控，通过

4、一系列的蛋白与蛋白相互作用、体内的磷酸化作用等介导的。了解这些蛋白与蛋白的相互作用将有助于我们对精子发生和肿瘤发生机制的理解，从而找到治疗的突破口。TPR样蛋白是一类蛋白超家族，主要的生理活性不仅可以介导蛋白与蛋白质之间的相互作用，其本身也可以和其它蛋白相互作用参与南京医科大学硕士学位论文细胞活性的调节。目前，我们对于精子发生障碍和肿瘤发生机制仍然不是彳艮清楚，没有特异性的治疗手段，患者在治疗过程中同时也承受着巨大的心里压力和生理负担。而由于精子发生和肿瘤发生有着如此密切的相关性，现在将精子发生和肿瘤发生联合起来研究已经成为热点，这

5、为寻找到特异性治疗精子发生和肿瘤发生的突破口以及有效的治疗方法提供了令人期待的前景。本文通过对一系列与肿瘤和睾丸发生相关的TPR样蛋白的功能和作用机制研究，探讨TPR样蛋白在肿瘤和睾丸发生中具体的作用及其作用机制，为寻找特异性的治疗方法奠定生物学基础。根据上述的目的，并结合本实验室的实际情况，对一系列肿瘤和睾九发生相关的TPR样蛋白进行深入研究。本课题包括两部分：一．NYD．SPl4一个新的TPR结构域样蛋白的基因功能研究。二．TPR样蛋白介导的蛋白与蛋白相互作用的作用机制研究。4南京医科大学硕士学位论文第一部分NYD．SPl4一个

6、新的TPR结构域样蛋白的功能研究摘要目的：通过研究一个本实验室发现的全新TPR样结构基因NYD—SPl4及其与其他蛋白的相互作用，以进一步探讨NYD．SPl4可能的生物学功能和在精子和肿瘤发生和发展过程中的作用机制。方法：构建一系列NYD—SPl4、PP2A的A亚单位以及C亚单位、HRB2、HSP70、HSP90酵母表达载体、荧光表达载体和原核表达载体。通过RT-PCR分析NYD．SPl4在多组织中差异性表达研究NYD—SPl4与睾丸发育的关系。采用酵母双杂交技术和GSTpulldown实验验证NYD-SPl4与PP2A的A亚单4．

7、壶．(PP2R1A)3,Y,75tC亚单4)-(PP2AC)、HRB2、HSP70、HSP90的相互作用以及这些相互作用的明确位点，通过序列比对及与之相互作用的蛋白质推断NYD．SPl4可能的生理学功能已经一步研究。通过体外原核细胞表达出NYD—SPl4蛋白，纯化获得单一的His-NYD—SPl4蛋白，将纯化好的NYD．SPl4蛋白免疫Babla／C小鼠获得NYD．SPl4多克隆抗体。NYD—SPl4、HRB2荧光表达质粒转染HELA细胞稳定筛选后观察NYD．SPl4、HRB2这两个在研究中发现的新的蛋白质在HELA细胞的表达定位。

8、通过免疫组化观察NYD—SPl4在睾丸及浸润性乳腺癌组织中的表达。结果：通过RT-PCR分析不同发育时期小鼠睾丸中NYD—SPl4的表达量研究NYD—SPl45南京医科大学硕士学位论文与睾丸发育的关系，以证明该基因与细胞增殖相关。RT