疫学检查在传染病中的应用

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1、临床免疫学检验免疫学检验的常用技术免疫学检验的常用技术免疫比浊技术生物素与链酶亲和素的应用技术金标记酶免分析技术免疫电泳技术抗体提取纯化技术放射免疫分析技术免疫荧光测定技术酶联免疫吸附试验化学发光免疫分析技术免疫印迹技术流式细胞术金标记酶免分析技术金标记免疫分析技术也称免疫胶体金技术，利用硝酸纤维素（NC）膜等为固相载体，使金标记的抗原或抗体与特异配体的反应在膜上进行，建立了快速的金标记免疫渗滤技术和金标记免疫层析技术，并在传染病、心血管病、风湿病、自身免疫病的免疫学检测中广泛应用。金标记酶免分析技术原理：将滤金酸（HAuCl4）用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒（胶体金），标记金黄

2、色葡萄球菌A蛋白（SPA）或抗体，用于免疫印迹、免疫渗滤、免疫层析试验。金标记免疫层析是利用NC膜条状纤维的毛细管作用，是样品在泳动中与金标记物及包被在NC膜上的抗原或抗体结合，出现呈色的阳性信号。酶免疫技术酶和酶作用的底物：1.辣根过氧化物酶（HRP）,常用底物为邻苯二胺(OPD)，四甲基联苯胺(TMB)和ABTS。2.碱性磷酸酶(AP)，多采用对硝基苯磷酸酯为底物。3.其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。酶联免疫吸附试验★原理：酶联免疫吸附技术是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。基本原理是将待测抗原或抗体先固定于固相载体表面，再用酶标记的抗原或抗体与已被固定的

3、相应抗体或抗原发生特异性反应，加入酶底物及色原后呈色，呈色程度用吸光度（A）值表示，所测A值与待测抗体或抗原的水平呈相关关系。酶联免疫吸附试验1.间接法：用于检测样本中特异性抗体将已知特异性抗原包被于聚苯乙烯板微孔，形成固相抗原；洗弃未结合的抗原；加待检样本，若其中含有特异性抗体则与固相抗原结合形成抗原-抗体复合物；洗弃未反应的部分，加酶标记抗抗体（一般为标记抗人IgG或葡萄球菌A蛋白），使在固相载体上形成抗原-待检抗体-标记抗体复合物；洗弃未反应的部分，加入酶底物及色原呈色，在一定波长下测吸光度（A）值判定待测抗体的有无和水平。酶联免疫吸附试验2.竞争法：用于检测待检样本中未知抗

4、原或抗体。测定抗原（抗体）时用已知抗体（抗原）包被固相载体，然后同步加入含有待测抗原（抗体）的样本和酶标记抗原（抗体），使待测抗原（抗体）与酶标记抗原（抗体）竞争结合在固相载体上的抗体（抗原）；洗板；加酶底物及色原呈色。待测溶液抗原（抗体）量越多，则被结合的酶标记抗原（抗体）量越少，呈色越浅。呈色深浅与待测抗原（抗体）的量成反比。酶联免疫吸附试验3.双抗体或双抗原夹心法：双抗体夹心法：用于检测相对分子质量较大的蛋白质抗原先将已知特异性抗体包被于固相载体上，加待测样本，若其中有相应的抗原则与固相抗体特异性结合；洗板后加入酶标记特异性抗体，使在固相载体上形成包被抗体-待测抗原-酶标记抗

5、体复合物；洗板；加酶底物及色原呈色。抗原或抗体水平与所测吸光度（A）值呈正相关。双抗原夹心法：用包被抗原和酶标记抗原检测样本中的特异性抗体。酶联免疫吸附试验4.捕获法5.生物素与亲和素ELISA(ABC-ELISA)酶联免疫吸附试验试剂组成1.标记用酶：最常用辣根过氧化物酶（HRP）标记各种抗体、抗原或亲和素2.酶底物与色原：HRP的底物是H2O2（或过氧化脲）；HRP可用的色原很多，常用的为邻苯二胺（OPD），3，3，，5，5，-四甲基联苯硫酸盐（TMBS）等。传染病的免疫学检查1.甲型病毒性肝炎（HAV）2.乙型病毒性肝炎(HBV)3.丙型病毒性肝炎(HCV)4.抗人类免疫缺陷

6、病毒（HIV）5.梅毒血清学检测（TP）6.丁型肝炎(HDV)甲型病毒性肝炎（HAV）HAV属小RNA病毒，为正单链RNA病毒。HAV主要经粪-口途径传播。潜伏期平均28天。HAV抵抗力较强，60℃加热10-12h后仍具有感染性，85℃加热立即灭活，对乙醚、氯仿及PH为3的酸性环境有抵抗力。甲型病毒性肝炎（HAV）诊断甲型肝炎的特异性血清学指标是抗HAV的IgM类抗体和IgG类抗体。人感染HAV后，血液中首先出现抗HAV-IgM,与发病后2~3周达高峰，因此抗HAV-IgM是公认的早期诊断甲型肝炎的指标。抗HAV-IgG一般在急性感染后6个月达高峰，然后逐渐下降，但维持时间较长，可

7、终身存在。因此抗HAV-IgG可作为人群HAV既往感染的检测指标。乙型病毒性肝炎生物学性状：HBV属于嗜肝DNA病毒科。为双链环状DNA。完整的HBV病毒称为Dane颗粒，球形，有包膜(即HBSAg)。HBV有三种颗粒：大球形颗粒，具有感染性的完整颗粒，又称Dane颗粒；小球形颗粒，无传染性；管形颗粒，不含病毒核酸由小球形颗粒串联而成。乙型病毒性肝炎HBV抗原包括：①表面抗原（HBSAg），是HBV的衣壳蛋白，是HBV感染的主要标志，具有抗原性，可刺激机体产生抗HBS