紫草素对寻常型银屑病患者外周血单个核细胞产生IFN-r、IL-4的影响

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1、(一)研究对象l、银屑病患者来自中国医科大学附属第一医院皮肤科，经临床确诊为寻常型银屑病，共34名，男24名，女10名，年龄19．74岁(平均39-土：14岁)，见附表1。病例要求①近一个月未接受任何系统治疗，如皮质类固醇、免疫抑制剂等。②无肿瘤及其它自身免疫性疾病。③近两周无感染史。④疾病处于进展期。2、正常人来自自愿献血者20名，男10名，女10名，年龄25．45岁(平均31士7岁)，无银屑病及其它自身免疫性疾病史，见附表2。(二)主要试剂葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll—Hypaque)购自上海华

2、精生物科技公司、RPMll640培养液和Hank’s缓冲液购自沈阳博尔美公司、紫草素购自日本和光(Wako)生物试剂公司)、PHA购自Sigma公司、人IFN．r及IL-4ELISA试剂盒购自武汉博士德公司。二、实验方法(一)ELISA法检测血清IL4、IFN．r的含量空腹采取20名银屑病患者及20名正常人外周血5ml，离心分离血清，ELISA法检测IL．4、IFN．r的含量。(二)分离外周血单个核细胞(PBMCs)空腹采取14名银屑病患者及lO名正常人外周血5ml，肝素抗凝，用Ficoll密度梯度法

3、分离外周血单一核细胞(PBMC)，以RPMll640培养基配成l*106细胞／ml。(三)PBMCs的培养将PBMCs加入96孔培养板中，每个培养条件设二个复孔。放入37’C，5％c02培养箱，培养72后收集上清液。正常人PBMCs分为两组：空白组(PBMCs+RPMll640培养液)和PHA组(PBMCs+12．5ug／mlPHA+RPMll640培养液)。将银屑病患者PBMCs分为八组，分组为：空白组(PBMCs+RPM11640培养液)、低浓度紫草素组(PBMCs+2．5ug／ml紫草素+RPM

4、ll640培养液)、中浓度紫草2素组(PBMCs+7ug／ml紫草素+RPMll640培养液)、高浓度紫草素组(PBMCs+12．5ug／ml紫草素+RPMll640培养液)、PHA组(PBMCs+12．5ug／mlPHA+RPMll640培养液)、PHA+低浓度紫草素组(PBMCs+12．5ug／mlPHA+2．5ug／ml紫草素+RPMll640培养液)、PHA+qb浓度紫草素组(PBMCs+12．5ug／mlPHA+7ug／ml紫草素+RPMll640培养液)、PHA+高浓度紫草素组(PBMCs

5、+12．5ug／mlPHA+12．5ug／ml紫草素+RPMll640培养液)。(四)ELISA法检测各PBMCs培养上清液中IFN．r／1L．4含量实验结果(一)病例组较对照组血清中IFN．晗量明显升高，IL．4含量下降与正常人相比，患者血清中删始量明显升高，血清中IL4含量下降。(二)不同培养条件下PBMCs培养上清中IFN．r的水平PHA刺激下，银屑病患者和正常人均较无PHA刺激时PBMCs培养上清IFN．r明显升高。但不论有无PHA*0激，银屑病患者PBMCs培养上清IFN-r较正常人明显升高

6、。随着紫草素浓度增加，银屑病患者PBMCs培养上清中IFN-r逐渐下降。(三)不同培养条件下PBMCs培养上清中IL．4的水平PHA刺激下，银屑病患者和正常人均较无PHA*0激时PBMCs培养上清IL．4明显升高。但不论有无PHA刺激，银屑病患者PBMCs培养上清中IL-4较正常人降低。随着紫草素浓度增加，银屑病患者PBMCs培养上清中IL一4逐渐升高。结论紫草素能抑fl；lJThl型细胞因子IFN．r的分泌，而促进Th2型细胞因子IL．4分泌。关键词银屑病；PBMCs；IL．4；IFN．r；紫草素3

7、·英文论著摘要·EffectofShikoninonIL一4／IFN—rproducedbyperipheralbloodDnuclearcellsofpatientswil：hperiplleral100mononuclearcellsolpatientswithPsoriasisVulgarisObjectivePsoriasisisacommonchromcinflammatorydermatosis，whosepathologicalchangeshavethethreemajorcharac

8、teristics：keratinocytehyperplasia,inflammatorycellinfiltration，angiogenesis．AstuayfoundthatpsoriasishastheexistenceofThlcelldifferentiationbiaswhichshowedthatThltypecytokineIFN-TinserumafterTcellsinperipheralbloodofpsoriasispatie