《遗传测序仪介绍》PPT课件

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1、3500/xl遗传测序仪介绍肖怀东FieldApplicationScientistTel:4008208982/8008208982E-mail:CNAPMsupport@lifetech.comAB遗传分析仪发展历史3703733773100(A),3130（xl）3103730(xl)平板胶电泳毛细管电泳3500,3500（xl）1986年370型全世界第一台基因分析仪1991年373型基因分析仪1995年377型基因分析仪，光栅+CCD1996年310型毛细管基因分析仪,全世界第一台毛细管分析仪1997年377-96基因分析仪199

2、8年3700型96道毛细管基因分析仪2000年310016道毛细管基因分析仪2002年3100Avant4道毛细管基因分析仪2002年373048道毛细管基因分析仪3730xl96道毛细管基因分析仪2004年31304道毛细管基因分析仪3130xl16道毛细管基因分析仪2007年10月新一代超高通量序列分析仪SOLID2009年3500系列毛细管基因分析仪2010年第三代测序仪IonTorrent主要内容测序仪工作原理仪器的结构及DC软件应用测序仪工作原理电进样DNA在碱性环境下带负电荷带负电荷的DNA在强电场作用下进入毛细管15kv仪器工

3、作原理——电进样TRIVIA:电进样意味着什么?只有带电分子能够进入毛细管.+仪器工作原理-通过毛细管电泳分离DNA片段H+H+H+H+H+H+H+H+H+H+负极正极TRIVIA:什么样的片段泳动的更快?-仪器能够区分带电的DNA和其他带电分子吗?小片段不仪器工作原理-荧光标记的DNA片段在检测窗口被检测双向激发仪器工作原理-激发出的荧光由于波长不同而被分离，并被CCD相机收集TRIVIA:什么是CCD?ChargedCoupledDevice电荷耦合器件CCD相机收集波长范围520nm到650nm（发射波长）虚拟的光栅设置氩离子激光，激

4、发波长488nm，514nm.仪器工作原理荧光标记的DNA在电场中由负极向正极移动,依次通过激光检测区,小片段在前,大片段在后激光束在检测窗口同时激发16/4根毛细管,荧光分子被激发,产生荧光信号发射的荧光信号被CCD相机收集软件将光学信号转化为电信号LaserEnergy:CCDElectrophoresis+-dye毛细管空间定位(SpatialCalibration)?什么是空间定位？–空间定位将标记出每道毛细管在CCD上的对应位置，使信号收集软件(DataCollection)能够找到它们。什么时候要做空间定位?毛细管安装完成后,包

5、括重新安装用过的旧毛细管移动或调节了毛细管检测窗口的位置仪器移动后作为仪器日常维护的一部分怎么做?当仪器正常启动，毛细管已经安装在仪器上，仪器上的相应位置已经放置了胶、缓冲液和水；进入DataCollection软件，点击窗口左边的SpatialRunScheduler进入空间定位页面；在左下角Protocol中选择一种运行模式，有不灌胶和灌胶两种模式毛细管空间定位(SpatialCalibration)指标:峰高大致相同峰型尖锐、左右对称橙色十字在峰顶端间距:13-16空间定位——结果评估Clicktosavethecalibration

6、datatothedatabase空间定位——结果评估Clickforanyfailedcalibration空间定位——结果评估如果空间定位失败怎么办?重复做一次空间定位若无效，观察系统中有无气泡，去除气泡后再定位若无效，重新安装毛细管的检测窗口，进行空间定位若无效，取下毛细管，用枪吸取无水甲醇冲洗毛细管检测窗口上的凹槽，待甲醇晾干后将毛细管装回，进行空间定位空间定位——结果评估问题可能的原因改进措施杂信号检测窗口脏毛细管位置不恰当清洁检测窗口重装毛细管间距不好检测窗口脏清洁检测窗口没有峰图毛细管里没有胶灌胶肩膀峰检测窗口脏清洁检测窗口空

7、间定位——故障排除让机器认识纯荧光。每个染料都有自己的最大发射波长，但是不同染料之间有相互重叠的部分，重叠的部分通过光谱校正来识别。光谱校准——目的光谱重叠结果:光谱校正后光谱校准——目的多重颜色检测光谱校准——目的什么时候做?使用新的染料组合调整过仪器的光路系统不同颜色的荧光间出现干扰(有拔起或下压峰)参数改变(如毛细管长度改变)作为每年一次的日常维护怎么做?按照试剂盒说明书配制Matrix,对于8道或者24道的仪器,分别加第一个run的孔,每个孔加10µl配置好的混合物.在DataCollection窗口中操作光谱校准概要仪器结构仪器耗

8、材仪器开机样品检测流程及DC软件介绍仪器关机电源开关自动进样器按纽内部照明灯开关状态灯仪器结构——外观网络插口断路开关电源插头宽度：61cm深度：61cm高度：72cm重量：82