挥发性盐基氮检测作业指导书

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1、挥发性盐基氮检测作业指导书【微量扩散法】1.目的为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。2.适用范围本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。3.职责检验人员负责对肉类TVB-N的检测,并根据检验结果进行判定。4.工作程序4.1.原理肉类TVB—N原理:挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用,在腐败过程中,使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。挥发性含氮物质可在37℃碱性溶液(饱和碳酸钾溶液)中释出,挥发后吸收于吸收液(2%硼酸)中,用标准酸滴定,计算含量。4.2.使用试剂4.2.1.饱和碳酸

2、钾溶液称取50g碳酸钾,加50mL水,搅拌助溶、过滤,使用上清液。4.2.2.水溶性胶称取10g阿拉伯胶,加10mL水,再加5mL甘油及5g无水碳酸钠(或无水碳酸钾),研匀。4.2.3.硼酸吸收液硼酸(20g/L)溶液。用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50mL的移液管准确移取50mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.4.2.4.盐酸[c(HCL)=0.001mol/L]的标准滴定溶液。参照GB/T601-2002A.基准试剂(无水Na2CO3)称取在270~300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂

3、无水Na2CO3:5.4g加入500mol的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成0.1mol/L的Na2CO3溶液;再取10ml浓度为0.1mol/LNa2CO3溶液至1000ml的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配制成0.001mol/L碳酸钠溶液,待用.B.0.001mol/L的盐酸溶液的配制取36%的盐酸8.4mL至100mL的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成约0.1mol/L的盐酸。再取10ml浓度为0.1mol/Lmol的盐酸至1000ml的容量瓶,加入蒸馏水定容,配制成约0.001mol/L的盐酸溶液。C.溴甲酚绿-二甲基红的

4、配制:即3体积0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与1体积0.2%的甲基红乙醇溶液混合。a.0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液配制称取0.10g溴甲酚绿,溶于乙醇,用乙醇稀释至100ml即可。b.0.2%的甲基红乙醇溶液配制称取0.20g甲基红,溶于乙醇,用乙醇稀释至100ml即可。c.溴甲酚绿-二甲基红将0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与0.2%的甲基红乙醇溶液按3:1的体积比混合摇匀即得溴甲酚绿—甲基红混合指示剂。(GB/T603-2002)D.0.001mol/盐酸的标定用10ml移液管吸取10ml0.001mol/L碳酸钠溶液,加入10滴溴

5、甲酚绿-二甲基红,用0.001mol/L的盐酸溶液滴定至溶液颜色由绿色变成暗红色,煮沸2min冷却后继续滴定至溶液成暗红色,读出所用0.001mol/L的盐酸的体积数.计算出盐酸的mol浓度.标定前颜色标定后颜色1.1.1.2g/l甲基红乙醇溶液称取0.2克甲基红,加入100ml分析纯乙醇,震荡均匀。1.1.2.1g/l.次甲基蓝溶液称取0.1克次甲基蓝,加入100ml蒸馏水,震荡均匀。注:将4.2.5与4.2.6两种指示剂等量混合为混合指示剂。1.2.仪器设备微量扩散皿微量滴定管:最小分度0.01ml。恒温培养箱1.3.检

6、验流程8加水和甘油研磨搅匀9在微量扩散皿外缘涂抹胶体11用1ml吸管吸取1ml饱合K2CO31肉类品取样,暂存2样品处理,搅碎3称取10g样品放入250ml三角瓶内三角瓶内5将三角瓶放入震荡器振荡30min6将均质液过滤10用1ml吸管吸取1ml样品滤液7称取阿拉伯数胶无水碳酸钠17加盖,摇匀18:36℃±1℃培养2h19滴定20计算21报告4将100ml蒸馏水放入三角瓶内摇匀12用1ml吸管吸取1ml2%硼酸溶液13用1ml吸管吸取1ml2%甲基红乙醇溶液14用1ml吸管吸取1ml1%次甲基蓝溶液15摇匀混合混合16用滴管

7、移取2至3滴混合操作步骤:1.1.1.肉类品取样,暂存用洁净的刀取肉类表层2cm处,去皮和肉筋,用小胶袋包装好暂存在0~5℃冰箱内暂存。1.1.2.样品处理,搅碎将肉取出,用刀或剪刀除去脂肪、骨、肌腱,绞碎搅匀,用绞肉机碎肉时注意安全。样品用刀或剪刀去除脂肪、骨、肌腱1.1.3.称取10g样品放入250ml三角瓶:用镊子将绞好的肉准确镊取10g,放入三角瓶。称量10g样品称量空三角瓶1.1.4.将100ml蒸馏水放入三角瓶内摇匀:用量筒准确量取100ml蒸馏水,先倒入约15ml蒸馏水入三角瓶,震荡,用玻璃棒搅拌,再放入剩余的

8、蒸馏水后用锡箔纸封存好。加入100ml蒸馏水1.1.1.将三角瓶放入震荡器振荡:震荡30min。样品液振荡1.1.2.将均质液过滤:用滤纸将均质液过滤。待用。样品液过滤备用1.1.3.水溶性胶配制1.1.3.1.称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠:按一个样品需用三个扩散皿,每皿需用1克树胶、0.5

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