血友病A遗传诊断和基因治疗的研究进展.pdf

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1、第34卷第9期Vo1．34，No．9生殖与避孕doi：10．7669~．issn．0253·357X．2014．09．0765Reproduction＆ContraceptionE‘mail：randc2014年9月Sep．2014_joumal@163．corn血友病A遗传诊断和基因治疗的研究进展牛文彬1孙莹璞1梁德生2(1．郑州大学第一附属医院生殖医学中心，郑州，450000)(2．中南大学医学遗传学国家重点实验室，长沙，410000)【摘要】血友病A是伴x连锁隐性遗传病，其病因是由于位于x染色体上的编码凝血因子FVIII基因缺陷导致机体凝血机

2、制紊乱而出血不止，严重危害患者的身体健康和生命安全。血友病A可通过直接法和间接法检测进行诊断，对血友病A携带者可于孕早期进行有创或无创的胎儿遗传学诊断，行辅助生殖的携带者可于胚胎植入前遗传学诊断(PGD)。对血友病A的基因治疗目前尚处于动物研究阶段，主要通过基因转移载体来实现提高机体FVIII的分泌，其最珍贵的靶细胞是造血干细胞，有望不久的将来更好地服务于血友病患者及携带者。关键词：血友病A；遗传风险；基因诊断；植入前遗传学诊断(PGD)；基因治疗中图分类号：R715．5文献标识码：A文章编号：0253-357X(2014)09-0765—06血友

3、病A是伴x连锁隐性遗传病，其病因是由变导致FⅧ蛋白表达下降或FVi蛋白活性下降，而于位于x染色体上编码凝血因子FⅧ的基因缺陷，导引起患者凝血功能障碍。根据血浆中凝血因子FⅧ致机体凝血机制紊乱而出血不止，严重危害患者的身活性水平的不同，可将血友病A病情的严重程度分体健康和生命安全。血友病A患者和携带者在生育为3类：重型(FⅧ活性≤1％)，中型(1％～5％)和轻型下一代时，存在较大的遗传风险，因此需要对血友病f5％一20％)，重型血友病A患者会出现自发性出血的A家系进行明确的基因诊断，明确遗传风险，利用产症状而危及生命【”。由于编码凝血因子，Ⅷ的基因前

4、基因诊断技术和植入前遗传学诊断(PGD)技术来位于x染色体上，因此血友病A的发病群体多为男预防、避免血友病A患儿的出生。同时对于血友性，其在男性中的发病率为1／5000，女性患者罕见，病A患者，利用先进的遗传学技术对其进行基因治约60％的患者有遗传病家族史，另外约40％的患者疗，较目前仅缓解出血症状的治疗方式，是一种理想为新发突变[2]。的血友病A治疗策略。1．2血友病A的遗传风险评估FⅧ基因位于x染色体长臂末端(Xq28)，上世1血友病A的病因和遗传风险纪八十年代初，Gitschier和Toole等的研究小组利用基因技术成功克隆了人Ⅷ基因和cDN

5、A序~lJt3,4]，1．1血友病A的病因揭示了血友病A的遗传病因学，为其遗传诊断和遗血友病A是由于编码凝血因子FⅧ的基因缺陷传风险评估奠定了理论基础。血友病A为伴X染而导致的机体出血紊乱性遗传疾病，由于FVllI基因突色体隐性遗传病，其遗传方式主要表现为以下几个通讯作者：孙莹璞：Tel／Fax：+86—371-66913635；特点：①人群中男性患者远多于女性患者，对于单个E—mail：syp2008@vip．sina．com系谱而言，往往只见到男性患者；②双亲无病时，女765—儿不会发病，但儿子可能发病，儿子如果发病，母亲22号内含子倒位检测技

6、术的研究主要采用Southern则是携带者，女儿亦有1／2的可能性为携带者；③男blotting和PCR技术，1993年，在Lakich等的研究中[61，性患者的兄弟、外侄、外孙以及母方的血缘男性首次采用Southernblotting技术，检测到约半数重型亲属如外祖父、舅父、姨表兄弟等也可能是患者；血友病A患者存在FⅧ基因22号内含子的倒位。④女性患者的父亲亦为患者，母亲为携带者或患者；Southemblotting技术可以准确查出基因是否有倒位，⑤相当一部分散发病例起因于新产生的突变，疾病并能够区分远端倒位和近端倒位，但操作繁琐，周期的适合度越

7、低，来源于新突变的比例越高。血友病A长，DNA用量大，需要使用放射I生同位素。随后，Liu患者或携带者在生育子代时，参照上述遗传方式特征，等的研究小组首次提出[7I8】，应用长距离DNA扩增(1ong进行遗传咨询，评估遗传风险。distancePCR，LD-PCR)技术检测FⅧ基因22号内含子倒位，该方法操作简单，周期短，但是扩增难度较2血友病A的基因诊断技术和胚胎植入前大，重复性差。2008年，Rossetti等首次提出运用反遗传学诊断fPGO)向-PCR(inverseshifting．PCR,IS-PCR)检测FⅧ基因22号内含子倒位[91，

8、该方法检测成功率高，重复性好，2．1致病基因FⅧ的结构和突变类型还可以对同源重组引起的重复或缺失进行检测。FⅧ基因位于x染