《DNA重组技术的基本工具》课件解读.ppt

《《DNA重组技术的基本工具》课件解读.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基因工程专题1每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本。治疗糖尿病特效药——据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。胰岛素思考：转基因技术实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。这些性状的表达与我们学过的基因的什么过程有关？密码子在生物界是　　　的！DNA(基因)　　　mRNA蛋白质(性状)转录翻译共用基因工程的产物基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过和，赋予生物以，创造出更符合人们

2、需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在水平上进行设计和施工的，又叫做技术。定向地改造生物的遗传特性。转基因技术体外DNA重组DNA分子DNA重组新的遗传特性基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花　　抗虫棉基因工程培育抗虫棉的关键步骤：关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出

3、来关键步骤二：抗虫基因与棉花DNA“缝合”关键步骤三：抗虫基因进入棉花细胞一、DNA重组技术的基本工具解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？“分子手术刀”——限制性核酸内切酶关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：抗虫基因与棉花DNA“缝合”关键步骤三：抗虫基因进入棉花细胞“分子缝合针”——DNA连接酶“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体1.1、DNA重组技术的基本工具思考：⒈自然界是否存在一种生物的DNA进入另一生物的情况？2.单细胞生物并没有在进化中灭绝，有何保护机制？可能产生了一些特殊的酶来防范。可而这种酶

4、能识别外来侵入的DNA并将其分解，而对自身的DNA不能起作用。“分子手术刀”——限制性核酸内切酶1.“分子手术刀”——限制酶（1）来源：主要是从中分离纯化出来的。（2）功能：①能够识别双链DNA分子的某种特定的，②并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开.(切割部位一般都具有反向重复序列）因此具有专一性(特异性）。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：和。原核生物核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端平末端思考与探究P7（2）1、细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列；2：通过甲基化酶将

5、甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？T磷酸二酯键1234512345AGoback限制酶DNA解旋酶区别限制性内切酶与解旋酶的区别切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键将DNA两条链的氢键打开形成两条单链限制酶的识别序列：能被限制酶特异性识别的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的。想一想限制酶所识别的序列有什么特

6、点？EcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。SmaⅠ平末端　　　平末端要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。思考?……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………C

7、TTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段……G　　AATTC…………CTTAA　　G…………G　　AATTC…………CTTAA　　G……酶切二、“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.②作用原理：催化形成磷酸二酯键③类型：类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性

8、末端和平末端(效率较低)相同点差别可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶（或T4DNA连接酶）即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键T4DNA连接酶还可把平末端之