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1、小鼠GRO/KCELISA检测试剂盒日本IBL进口原装货号:27137规格：96T前言简介小鼠趋化因子GRO/KC是一种强效的嗜中性趋化因子,与人GRO为同源物,为单核细胞和中性粒细胞的化学诱导物.据报道它是由激活的单核细胞和纤维原细胞产生的原理此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠GRO/KC的量成正比.检测范围23.44~1,500pg/mL预期用途■此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中GRO/KC的定量检测■重组和天然的小鼠GRO/KC都可以检测试剂盒成分1预包被板:抗小鼠GRO/KC兔子IgG,亲合纯化9
2、6T2酶标记抗体:(30倍浓缩)HRP标记抗小鼠GRO/KC兔子IgG,亲合纯化0.4mLx13标准品:重组小鼠GRO/KC0.5mLx24EIA缓冲液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS30mLx15标记抗体稀释液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS12mLx16显色剂:TMB底物液15mLx17终止液:1N硫酸12mLx18浓缩洗涤液:(40倍浓缩)含1%BSA,0.05%吐温20BPS50mLx1操作说明1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm)微移液管及其枪头量筒及烧杯蒸馏水冰箱(4°C)坐标纸(log/log)吸水纸试管(用于标准品稀释
3、)温育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)2准备1)洗涤液的准备试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950mL蒸馏水稀释50mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液.置于冰箱内可保存2周.1)酶标记抗体的准备试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍.示例:如果你用一条板(8孔),就需800μL.的标记抗体.就用870μL的标记抗体稀释液稀释30μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100μL浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C2)标准品的准
4、备加0.5mL的蒸馏水到瓶装标准品,制成浓度为3,000pg/mL小鼠GRO/KC标准品液3)标准品的稀释准备8支试管,并每支各加230μLEIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:试管11,500pg/mL试管2750pg/mL试管3375pg/mL试管4187.5pg/mL试管593.75pg/mL试管646.88pg/mL试管723.44pg/mL试管80pg/mL(样品空白对照)吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律稀释，标准品浓度范围为23.44-1500pg/mL,第8号管为0pg/mL作
5、为样品空白对照4)样品稀释样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释如果样品中小鼠的GRO/KC的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释梯度的样品液来确定最佳的检测浓度.3实验步骤使用前，将所有试剂应平衡至室温，大约30min，充分混匀，确保试剂质量无改变，标准曲线和样品检测必须同时进行.试剂待检测样品标准品样品空白试剂空白检测样品100ul稀释标准品（1-7管）100ulEIA缓冲液（第8管）100ulEIA缓冲液100ul盖板，于37°C下温育1小时洗板7次酶标抗体100ul100ul100ul-盖板，于37°C下温育30min洗板9次显色剂100ul100
6、ul100ul100ul室温避光温育30min终止液100ul100ul100ul100ul加终止液后,30min内于450nm处读取OD值1）设试剂空白对照，并于相应的微孔中加入100ulEIA缓冲液2）确定好样品空白对照孔，检测样品孔和标准品孔，分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。3）盖板，37°C下温育1小时4）用洗涤瓶剧烈洗板,再加入稀释洗涤液,静置15-30秒,再彻底倒去孔内反应液重复洗板7次.最后在吸水纸上拍干,去除残留液滴如用自动洗板机洗板,先自动洗4次,再按上述用洗瓶手工洗3次5）除试剂空白
7、对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体6）盖板，37°C下温育30min7）按照上述步骤4）洗板9次8）用一次性试管取所需量的显色剂，各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染，勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中9）室温避光温育30min，加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色10）每孔各加100ul终止液，溶液颜色会变成黄色11）擦去微孔板底部的污迹或水滴，确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪450nm处读取结果特别注意1)收集样品后应尽快检测.如需保存,冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温.2)如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释3)建议
