酱油中霉菌酵母菌计数检测二电子教案.ppt

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1、酱油中霉菌酵母菌计数检测二霉菌：霉菌是在培养基上长成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状的真菌。霉菌喜好在相对温度较低，湿度较高的环境中生长。酵母菌：酵母菌属于真菌，单细胞个体较大，菌落成圆形，边缘光滑，菌落个体与细菌菌落形状类似但个头较大。工作任务第一大组任务一：马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备第二大组任务二：无菌间梯度稀释和接种操作交换任务分两小组完成任务，每组制备500mL马铃薯-葡萄糖琼脂培养基，分装包扎后放入框内，灭菌。分两小组完成任务，轮流进入无菌间，进行样品的梯度稀释和接种工作。无菌间外等候的小组进行培养基预热和仪器设备

2、准备。实训目的1、掌握霉菌酵母菌梯度稀释和接种操作手法2、能够区分霉菌酵母菌与细菌总数梯度稀释和接种方法差异3、掌握霉菌酵母菌计数检测中梯度稀释和倾注法接种中的无菌操作要点仪器和设备吸量管1mL4支，25mL1支，带有225mL无菌水的三角瓶1只，带有9mL无菌水的试管3只，吸耳球，酒精灯，记号笔，样品原液。预热到45度左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基，培养皿4个，电炉或电热套。培养箱。任务一：培养基制备马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基制备配方：马铃薯（去皮切块）150g葡萄糖10.0g琼脂10.0g氯霉素0.05g蒸馏水5

3、00mL制法：将马铃薯去皮切块，加500mL蒸馏水煮沸10-20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至500mL。加入葡萄糖和琼脂，加热熔化，分装后，121度灭菌20分钟。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。任务二：梯度稀释和接种梯度稀释和倾注法接种：1、吸取25mL液体样品或称取25g固体样品，无菌操作法加入225mL无菌水中，摇匀制备成1：10样品溶液。用1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各取1mL，分别加入到2个无菌培养皿中。2、换一只无菌吸量管吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试

4、管中反复吹吸，制备成1：100样品溶液。用这支吸量管各取1mL1：100溶液，加入到2个培养皿中。3、再换一只无菌吸量管吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中反复吹吸，制备成1：1000样品溶液。用这支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到2个培养皿中。4、再换一只无菌吸量管，吸取1mL空白溶液，加入到无菌培养皿中。5、将预热到45度左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基加入15-20mL到装有1：10、1：100、1：1000和空白的培养皿中，混匀冷却，倒置培养28度，5天后观察。1、样品的稀释固体和半

5、固体样品：称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10充分稀释液。或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。取1ml1:10稀释液注入含有9ml无菌水的试管中，另换一只1ml无菌吸管反复吹吸，此液为1：100稀释液。按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管

6、2、接种根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1ml样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。及时将15ml~20ml冷却至46℃的马铃薯—葡萄糖—琼脂或孟加拉红培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。国家标准介绍目前使用标准：中华人民共和国国家标准GB4789.15—2010食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数适用范围：本标准规定了食品中霉

7、菌和酵母菌的计数方法。本标准适用与各类食品中霉菌和酵母的计数。检测流程检样25g（ml）样品+225ml无菌蒸馏水，均质10倍系列稀释选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内每皿中加入15ml~20ml马铃薯—葡萄糖—琼脂或孟加拉红培养基菌落计数报告操作步骤1、样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10充分稀释液。或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25

8、ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。取1ml1:10稀释液注入含有9ml无菌水的试管中，另换一只1ml无菌吸管反复吹吸，此液为1：100稀释液。按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管。2、接种根据对样品污染状