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时间:2020-11-28
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1、酶4介绍2抑制作用的类型酶的抑制作用不可逆抑制作用可逆抑制作用irreversiblereversible竞争性抑制⊙非竞争性抑制⊙反竞争性抑制⊙competitivenon-competitiveun-competitiveBack非专一性⊙专一性⊙比较⊙可逆与不可逆抑制抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失,能用物理方法如透析、超滤等除去抑制剂而使酶复活,抑制作用是可逆的。抑制剂与酶的必需基团以共价键结合而引起酶活力丧失,不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活,抑制作用不可逆。Back抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团,这些基团中包含了必需基团,因而引
2、起酶失活。非专一性不可逆抑制剂抑制剂类型被抑制基团酰化剂烷化剂还原剂和氧化剂有机汞、有机磷Back这类抑制剂选择性很强,它只能专一性地与酶活性中心的某些基团不可逆结合,引起酶的活性丧失。专一性不可逆抑制剂酶EnzymeSerO有机磷杀虫剂XPOORORHBack竞争性抑制作用ESESEPk1k2++k3+IEI酶酶酶底物抑制剂相同的结合位点机制动力学特征⊙实例⊙Backkiki=[E][I]/[EI]竞争性抑制的动力学特征v[S]无I有IVmaxVmax2KmKm’1/v1/[S]有I无Iv=———————V[S]Km(1+[I]/ki)+[S][I]增加Back竞争性抑制
3、实例磺胺药物的药用机理H2N--SO2NH2对氨基苯磺酰胺(磺胺)H2N--COOH对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸谷氨酸蝶呤叶酸叶酸嘌呤核苷酸的生物合成细菌正常生长人怎么办?吃!Back非竞争性抑制ESESEPk1k2++k3+IEIkiki=[ES][I]/[ESI]+S+IESIki=[EI][S]/[ESI]酶酶酶机制动力学特征⊙Backv[S]无I有IVmaxVmax2Vmax’Vmax’2KmKm’=1/v1/[S]有I无I[I]增加非竞争性抑制的动力学特征Back反竞争性抑制ESESEPk1k2++k3+IESIki=[ES][I]/[ESI]ki动力学特征⊙Back
4、v[S]无I有IVmaxVmax2Vmax’Vmax’2KmKm’1/v1/[S]有I无I[I]增加Back反竞争性抑制的动力学特征类型无抑制剂竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制方程式VmaxKmVmax不变减小减小Km减小不变增加各类可逆抑制的米氏方程及常数Back别构激活剂别构抑制剂(八)酶的别构效应别构——蛋白质在实现生物功能时构象发生变化,活力改变的现象。别构酶——具有别构现象的酶特点:1.多亚基一部分亚基有活性中心,另一部分有别构调解中心V=V[S]Km+[S]当V=90%V0.9Km=0.1[S][S]=9Km当V=10%V[S]=1/9Km[s]10%V[s]
5、90%V=812.底物也是调节物,不服从米氏方程S曲线:正协同<81(开关)—V↑随[S]↑而加快2米氏曲线1负协同3正协同321V10%V90%V0[S]Va仅底物是别构调节物时双曲线:负协同>81—V↑随[S]↑而减慢底物是别构抑制剂底物是别构激活剂别构酶举例:天冬氨酸转氨甲酰酶,简称ATCase八、酶活力测定检测酶的含量及存在,很难直接用酶的“量”(质量、体积、浓度)来表示。常用酶催化某一特定反应的能力来表示酶量,即用酶的活力表示。Back酶(活力)单位:在一定条件下,一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。1961年,国际生化协会:在最适的反应条件(30℃)下
6、,每分钟内催化一微摩尔底物转化为产物的酶量定为一个酶活力国际单位(U),即:1U=1μmol/min1972年,国际酶学委员会:在最适条件下,每秒钟内使一摩尔底物转化为产物所需的酶量定为1kat单位(katal),即:1kat=1mol/s1kat=6×107U酶活力的表示方法Back酶的比活力定义:每毫克蛋白质中所含有的酶活力单位数(国际酶委)。酶纯度的代表对于同一种酶,比活力越高,酶的纯度越高。碳酸酐酶制品:1000U/mg脲酶制品:500U/mg每毫克制品中含有100微克碳酸酐酶每毫克制品中含有200微克脲酶脲酶制品:1000U/mg每毫克制品中含有400微克脲酶Ap
7、pl.终点法:酶反应进行到一定时间后终止其反应,再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。酶活力测定方法动力学法:连续测定反应过程中产(底)物或辅酶的变化量,直接测定出酶反应的初速度。[A]的减少与[B]的增加均可以用来表明反应的进程AB对于反应Back反应时间(t)产物生成量浓度([P])斜率=浓度/时间=反应初速度酶促反应的初速度反应进程曲线Back酶+底物T0T1T2T3T4间接方法测定:电泳、层析、修饰后分析,etc。请注意:极端条件终止反应First!极端pH,极端温度酶活力测定的终点法时程反应(Tim
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