酶联免疫吸附试验(elisa)elisa夹心法测定抗原elisa间接法测定(精)教学提纲.ppt

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1、酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA夹心法测定抗原ELISA间接法测定(精)ELISA法双抗体夹心法测定抗原1.原理一步法二步法常用试剂盒分一步法和二步法，二者原理完全相同。一步法将图中的第2步和第3步同时进行，允许混合加入，其形成的免疫复合物，基本不影响目测的结果，适用于目测结果。二步法如图中第2步和第3步由于分步进行，其结果较准确，主要用于需要定量检测时。2.材料（以测HBsAg为例）试剂：HBsAg诊断试剂盒器材：酶联仪，微量加样器，吸头等3.方法加样：每组7微孔，待检4孔，空白对照1孔，阴、阳性对照各1孔。分别加阴、阳性

2、对照1滴和50ul待测样本于相应孔内，置37℃水浴箱温育30分钟。加酶：除空白对照孔外，每孔加1滴酶标溶液，混匀后封板，置37℃水浴箱温育30分钟。洗涤：用洗涤液（按说明配制）注满各孔，静置20秒，甩去洗涤液，重复4次，最后一次在吸水纸上拍干。显色：每孔加底物液A、B各1滴（50ul），轻拍混匀，置37℃水浴15分钟，肉眼观察。终止：每孔加终止液1滴（50ul），轻拍混匀。4.结果测定用酶标仪（450nm）测定各孔吸光度OD值（先用空白孔校零），P/N值≥2.1者判为HBsAg阳性，﹤2.1者判为阴性。ELISA法间接法测定抗体1.

3、原理2.材料（以测结核抗体为例）试剂：结核抗体诊断试剂盒器材：酶联仪，微量加样器，吸头等3.方法包被抗原：在聚苯乙烯微量反应板孔中加抗原100μl，4℃12－18小时。用1％BSA或正常兔血清4℃、12－18小时阻断，4℃冰箱备用。洗涤：用前应进行漂洗去除杂蛋白，用洗涤液洗3次，每次3分钟。加待测样本：将血清稀释成1：50，每份标本加复孔，每孔100μl，37℃保温30分钟。设已知的阳性和阴性血清对照。洗涤3次后，加兔抗IgG酶结合物，37℃保温30分钟，以相同的方法洗涤3次。加新鲜配制的邻苯二胺底物溶液和双氧水溶液各100μl。静

4、止20分钟，再加入3mol/L硫酸每孔50μl终止反应。4.结果测定肉眼观察：白色背景上观察四孔呈现的颜色反应，与已知阳性和阴性孔比较。酶联仪比色：酶联仪用492nm测OD值。正常人血清OD﹤0.39，结核患者≥0.4。正常人存在着结核抗体，一般为0.2－0.39。儿童卡介苗接种和隐性结核菌感染时可﹥0.4，但患结核病结核抗体OD值≥0.6，为轻度升高。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢