间充质干细胞对淋巴细胞的免疫调节作用研究

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1、江苏大学硕士学位论文摘要背景：间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是骨髓中不同于造血干细胞的具有多向分化的干细胞，近年来研究表明MSCs不仅在支持造血、器官移植中发挥作用，还发现MSCs对T／B淋巴细胞有显著的免疫负调节作用，但其免疫抑制的机制目前并不清楚。研究目的：探讨BALB／c小鼠MSCs或MSCs联合雷帕霉素(Rapa)对鼠牌淋巴细细胞的免疫调节作用，以及人MSCs对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用，为MSCs的临床应用打下基础。实验方法：(1)小鼠实验部分：常规分离培养BALB／c鼠的MSCs

2、，实验前用直线加速器(15GY)预处理。分离BALB／c鼠脾淋巴细胞，分别用刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)作为脾T淋巴细胞和B淋巴细胞的刺激剂。分组：脾细胞组(阳性对照组)，脾细胞+MSCs。组(脾细胞：MSCs=1：O．01)，脾细胞+MSCs：组(脾细胞：MSCs=1：O．02)，脾细胞+MSCs。组(脾细胞：MSCs=1：O．2)。脾细胞+MSCs(脾细胞：MSCs=1：O，02)+甫帕霉素(Rapa，终浓度为80ng／m1)组，脾细胞+Rapa组。采用MTT法检测脾淋巴细胞增殖的吸光值(D值)，流式细胞术(FCM)检测T、B淋巴细胞CD69

3、、CD28和CD86的表达和T淋巴细胞凋亡情况，实时定量RT—PCR(Rea卜timeRT—PCR)测定T淋巴细胞IFN—Y、IL一10mRNA的表达水平。(2)SLE患者实验部分：分离培养健康人MSCs，并用直线加速器(15GY)进行预处理。分离健康人和SLE患者外周血T淋巴细胞，在植物血凝素(PHA)刺激下，将人MSCs与T淋巴细胞作用。分组：T淋巴细胞组(阳性对照组)，T淋巴细胞+MSCs。组(脾细胞：MSCs=1：O．01)，T淋巴细江苏大学硕士学位论文胞+MSCs：组(T淋巴细胞：MSCs=1：O．02)，T淋巴细胞+MSCs。组(T淋巴细胞：MS

4、Cs=1：O．2)。采用MTT法检测T淋巴细胞增殖，FCM检测T淋巴细胞CDl52、CD28的表达，Rea卜timePCR测定IFN—Y和IL一6mRNA的表达水平。实验结果：(1)MSCs能明显抑制ConA和LPS刺激的小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0．01)，抑制T淋巴细胞凋亡(P

5、。MSCs或MSCs联合Rapa对T、B淋巴细胞CD69、CD28和CD86的表达均无明显影响(P>O．05)。(3)人MSCs可明显抑制健康人和SLE患者的T淋巴细胞增殖(P

6、调节机制十分复杂，可能与抑制T、B淋巴细胞增殖、抑制T淋巴细胞凋亡和干预T淋巴细胞相关的细胞因子mRNA表达有关，还可能与MSCs来源、作用对象不同等因素密切相关。关键词：间充质干细胞；淋巴细胞；雷帕霉素；系统性红斑狼疮；免疫调节江苏大学硕士学位论文ABSTRACTBacl喀roud：Mesenchymalstemcells(MSCs)arenonhematopoieticprogenitorcellsofthebonemaHowstromalcells．StudiesshowthatMSCscanalsoregulateallogeneicstem—cel

7、ltransplantationandthefunctionofTandBlymphocytes．HoweVer，themechanismsoftheimmunosuppressionarestillobscure．ObjectiVe：7roinVestigatetheimmunoregulatoryeffectsandpotentialmechanismofmurineMSCsandMSCscombinedwithrapamycinonSpleniclymphocytesandhumanMSCsonperipheralbloodT-1ymphocyteso

8、fnormalhumanandsystemiclup