疟原虫的镜检技术山东省寄生虫病防治研究所

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1、疟原虫的镜检技术山东省寄生虫病防治研究所魏庆宽各位领导、专家、同志们：下午好！疟疾流行于热带、亚热带及温带边缘地区，是重要蚊媒传染病，现有107个国家，约32亿人口受到疟疾传播的威胁，尤其是非洲最为厉害，特定于每年4月25日为非洲疟疾日。考虑疟疾的严重危害，WHO又将该日定为世界疟疾日。世界疟疾日由世界卫生大会在2007年5月第六十届会议上设立，旨在推动全球进行疟疾防治。2008年4月25日为首个世界疟疾日。卫生部结合我国实际情况，决定将每年4月26日作为“全国疟疾日”。我国传染病网络报告系统数据显示，疟疾年报告病例数由2002年的2.4万增加到2006年的6.4

2、万，近年来仍有上升趋势，尤其我省上升趋势更为明显，截止目前2009年疟疾发病人数明显超过去年同期，经济相对落后的鲁南、鲁西南地区发病较高；因此，敬请在座的各位同仁更要关注疟疾防治工作。2008年全国疟疾日宣传口号和主题信息一、活动主题：疟疾—一种没有国界的疾病（Malaria-adiseasewithoutborders）。二、宣传口号（一）防治疟疾，消除贫困。（二）全社会携手，共同抗击疟疾。三、主题信息（一）疟疾是由蚊虫传播的传染病。（二）非洲、南亚次大陆、东南亚的一些国家和地区是疟疾高度流行区，到上述国家及地区工作、生活、学习要谨防疟疾感染。（三）疟疾的症状主

3、要是发冷、发热、出汗，严重者可导致死亡。（四）预防疟疾最有效的办法是防止蚊虫叮咬。（五）早期诊断和全程、足量的规范用药是治疗疟疾的关键。（六）春季休止期治疗是清除疟疾传染源的重要措施之一。疟疾的实验室诊断1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测（2）循环抗体的检测3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准”仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。血检疟原虫是确诊疟疾最可靠的方法20世纪以来，随着显微镜的不断改进和染色方法的的不断完善，使显微镜

4、检查疟原虫的方法成为疟疾病原学诊断的重要手段。凡是疟疾，最终定能查到疟原虫，不存在没有疟原虫的疟疾。显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方法；因此下面我重点介绍一下疟原虫的镜检技术。疟原虫的镜检技术1.血膜制作与染色。2.厚、薄血膜中间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态结构及其鉴别要点。（王用斌大夫主讲）3.小结、镜检示教及读片练习。血膜的制作（取血时间）采血时间现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。间日疟在寒热发作期，外周血中主要可见环状体期；发作后数小时（h），见大滋养体期，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作

5、36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者退热后常查不到原虫。血膜的制作（取血操作）在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。取血部位和血量采血部位和方法：采血部位一般人为耳垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。耳垂或无名指，通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒大米（即火柴头）大小。血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈

6、薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。发热病人血片标本片薄血膜的制作薄血膜用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约②2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处。厚血膜的制作厚血膜用推片的左

7、下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。熟练工作者的推片姿势血膜的制作（涂片操作）涂制厚、薄血膜的位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各

8、1个；门诊