白血病淋巴瘤免疫分型

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1、白血病/淋巴瘤免疫分型苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所 卫生部血栓与止血重点实验室 朱明清2010年8月杭州1流式细胞术的基本概念流式细胞术(FlowCytometry,简称FCM)是一种可以快速、准确、客观,并且同时检测单个微粒(通常是细胞)的多项特性的技术,同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒,如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征,并加以定量2散射光信号和荧光信号前向角散射光(FSC,ForwardScatter)入射激光的前向散射光信号细胞相对大小及其表面积侧向角散射光(S

2、SC,SideScatter)入射激光90角的散射光信号细胞粒度及细胞内相对复杂性荧光素与特异抗体结合,荧光抗体与细胞抗原结合越多,产生的荧光信号越强。3CD45/SS示意图4实验对照的设计空白对照:ALL阴性对照:常用同型抗体对照单色分析:设同型抗体对照多色分析:同型对照,单阳性对照(用于仪器校正)阳性对照:检测阴性时5空白对照和阴性对照的比较:6CD3CD8需要用多少的标志来确证感兴趣的细胞群?它们在细胞上的分布是不是很近?它们是否在不同的细胞上表达不同?他们表达强还是弱?抗原表达CD3CD4CD3CD87抗原分布表面,胞

3、浆,核内是共同检测还是分别检测?表面胞浆核内CD3,CD4,CD8,tetramercytokinesDNACD3,4,8,tetramer+CytokinesCD3,4,8,tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8,tetramer+Cytokines+DNA8设门08-033079设门全部细胞门内细胞08-03307101112血液肿瘤分类进程13目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献14白血病免疫分型的理论基础白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿

4、瘤细胞,但仍能表达正常血细胞所具有的抗原,因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞,必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式,才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。15细胞类型鉴定Borowitzetal(1993)AJCP100:534-40.Steltzeretal(1993)AnnNYAcadSci667:265-28016CD45/SS示意图正常骨髓细胞血液肿瘤细胞老化粒细胞、噬酸细胞早幼—成熟粒细胞M3、CML单核细胞M4、M5LGL淋巴

5、细胞CLL、ALL、CLD正常前体细胞M0、M1、M2、嗜碱性粒细胞M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板M6、M7、MM细胞碎片Pre-B-ALL非血液来源细胞17B淋巴细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine18T淋巴细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine19粒细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine

6、20单核细胞分化与抗原表达关系图WoodandBorowitz(2006)Henry’sLaboratoryMedicine21非肿瘤T淋巴细胞表型22非肿瘤B淋巴细胞表型23非肿瘤粒细胞、单核细胞表型24非肿瘤粒细胞、单核细胞表型25白血病免疫分型根据白血病细胞表达的系列相关抗原,确定其系列来源。如:淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如:早前B,前B,普通B…26EGIL,1998年白血病积分系统分值B系T系髓系2CD79aCD3MPO(cyt)CD22TCRα/β(cyt)

7、IgMTCRγ/δ1CD19CD2CD117CD20CD5CD13CD10CD8CD33CD10CD650.5TdTTdTCD14CD24CD7CD15CD1aCD64*当髓系和一个淋系积分均>2分时,则诊断为急性混合细胞型白血病。27急性白血病的四大免疫类型单表型急性白血病表达某一个系列抗原为主的急性白血病双表型/双克隆急性白血病未分化型急性白血病28初治急白分型AcuteLeukemia–BlastsPresent>20%MyeloidLineageCD13+and/orCD117+and/orCD33+CD7+and/or

8、CD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid,noorminimalmaturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-,CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-

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