NIPT的临床运用—姚宏

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NIPT的临床运用西南医院产前诊断中心姚宏 开展NIPT要明确的内容一、为什么是NIPT？二、目标疾病：除21；13；18三体外，性染色体？其他染色体？微缺失、微重复？三、DS筛查与NIPT该如何临床运用？四、NIPT与胎儿超声检查该怎样关联？五、时限：晚孕可否行NIPT？六、双胎？七、临床运用 为什么是NIPT？ 胎儿DNA的特点和来源基本特点：1含量有一定的变化规律。妊娠第4周开始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而增加，存在个体差异，平均浓度7.5%2分娩后短时间内消失，平均半衰期为16.3min(4-30min)，2h就无法检出，前次妊娠情况不影响再次妊娠检测结果3DNA片段较小，平均166bp左右。常规技术很难检测来源：图1临床试验数据浓度随孕周变化趋势1胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来；2胎儿细胞凋亡；3胎盘滋养层细胞的凋亡 NIPT的基本原理 目标疾病：21；13；18三体性染色体？其他染色体？ 唐氏综合征唐氏综合征(Down’sSyndrome):俗称“先天愚型”，主要是由于细胞中多出一条21号染色体所导致的疾病。严重智力障碍，绝大多数生活无法自理。心智年龄发育迟缓，性格温驯、乐观开朗，素有“蜜糖天使”之称。发生率1/600-800，中国的唐氏综合征患者数量目前已超过100万，平均每年有约3万多名唐氏综合征婴儿出生。正常男性核型:46,XY47，XY，+21 唐氏综合征的临床表现唐氏综合征：患者面容特殊，两外眼角上翘，舌头常往外伸出，通贯手等。患者绝大多数为严重智能障碍并伴有多种脏器的异常，如先天性心脏病、白血病、消化道畸形等，给家庭和社会带来沉重的经济负担和心理负担。 染色体核型类型发生率类型92%标准型21-三体3~4%易位型21-三体2~4%嵌合型21-三体 染色体核型类型1、精子或卵子形成过程中21号染色体不分离，90%由卵子的21号染色体不分离引起（标准型）47,XX(XY),+212、受精卵卵裂过程中21号染色体不分离（嵌合体）46,XX(XY)[?]/47,XX(XY),+21[?]3、双亲的平衡易位（易位型）46,XX(XY),rob(15;21),(p10;q10)mat45,XX,rob(15;21)46,XX,rob(21;21) 特点一、偶发：育龄妇女每一次妊娠都有生唐氏儿的可能。二、母亲年龄：孕妇超过35岁时，发病率急剧增高。但多数妇女在35岁以前生孩子，所以80%的唐氏综合征患儿是由35岁以下的孕妇所生。 --Edward综合征（18三体）47,XX,+18部分症状：早夭，智障，残指自然发生率：1/8000-1/2000 ---Patau综合征（13三体）47,XX,+13部分症状：智力严重缺陷，兔唇，易发心脏病自然发生率：1/8000 性染色体综合征X和Y染色体数目异常或结构畸变所引起的疾病临床表现：性发育不全或两性畸形，有的患者仅表现出生殖力下降、继发或原发闭经、智力稍差、行为异常等常见核型：45,X47,XXY46,XX/46,XY46,XXq-46,Xi(Xq) 除21；13；18三体外，性染色体？常见染色体非整倍体异常发生频率常见染色体异常频率唐氏综合征1/60018-三体1/500013-三体1/15000Klinefelter综合征1/700XYY综合征1/800（男性中）XXX综合征1/1000（女性中）Turner综合征1/1500（女性中） 2011年6月-2012年12月5950无创提示性染色体异常33例总数XXXXOXXYXYY测序法阳性3314793(总样本量n=5950)阳性137231核型结果阴性113341拒绝诊断94221阳性预测值(PPV)54.17%70%40%42.86%50.00%检出率100%(13/13,95%CI75.3-100%),假阳性率0.18%(11/5937,95%CI0.1-0.32%)常见假阳性原因:1.母亲存在性染色体异常，造成母体背景影响2.性染色体异常嵌合Noninvasiveprenatalgenetictestingforfetalaneuploidydetects3.胎盘嵌合maternaltrisomyXPrenatalDiagnosis2012,32,1114–1116DetectionofFetalSexChromosomeAneuploidybyMassivelyParallelSequencingofMaternalPlasmaDNA:InitialExperienceinaChineseHospitalUltrasoundObstetGynecol2014;44:17–24.6 染色体异常分类多倍体(三倍体,四倍体…)数目异常多体非整倍体单体罗伯逊易位染色体异常Prenatal产前染色体间相互易位插入结构异常缺失重迭插入Postnatal生后先天性单条染色体倒位(体细胞)内环状染色体后天性(体细胞)等臂染色体基因扩增 数目畸变—发生率染色体异常流产(%)出生后（%)常染色体三体131.100.01165.580.00180.840.02212.000.11其它三体11.810.00总三体21.330.135X染色体单体8.350.01性染色体三体0.330.15三倍体5.790.00四倍体2.390.00总染色体异常41.520.60 微缺失、重复发病率：/14000--1/50000遗传特点：新发85%--95%家族性遗传：5—10%。遗传方式通常为常显发生机制：基因组上易于发生重排的局部区域：例如lowcopyrepeatsLCR低拷贝重复序列nonallelichomologousrecombination(NAHR)非等位同源重组 DS筛查与NIPT如何临床运用 国内中孕期筛查与NIPT结合的体系特点35岁以上国内孕妇人群•法律规定35岁以上的孕妇直接产前诊断NT>3mm11-14周NT测定•早孕期筛查以单独的NT测定为主•NT增厚的临床处理流程不明确中孕期三联筛查•中孕期筛查占绝大多数的比例•进行NIPT检测的孕妇人群孕周普遍偏大Risk>1/21/27022周出具检测报告送检医院检测低风险检测高风险随访产前诊断中心绒毛、羊水或脐血染色体检测确诊阳性者出具诊断书检测阴性干预、追踪随访 结果处置流程结果异常处置流程图无创提示T21、T18、T13三体高风险；SCA；CNV；OIF通知进一步检查（根据孕周羊穿或脐穿）同意拒绝T21、T18、T13,SCA(检测内容：1.胎儿核型及FISH告知无创的局限及可能导致2.夫妻双方染色体、）的不良后果，并签知情同意书CNV,OIF(1.胎儿核型2.夫妻双方染色体,胎儿CMA)胎儿超声检查，严密随访妊娠结局，出生后胎儿脐血检查、结果异常结果未见异常留存，胎盘留存核型异常核型正常，CMA异常常规产检，出生后随访，胎儿脐血、胎盘检查、留存签结果告知进一步处置：1.查阅数据库2.必书，妊娠结局要时夫妻双方CMA3.超声或随访，胎儿脐MRI血、胎盘检查、留存综合分析，报告解读，签结果告知书妊娠结局随访，留存标本 经验体会适应症的掌握至关重要检测异常结果应有专业人员处置，要重视以下内容NIPT检测的是胎儿（胎盘）及母亲的全基因组1、结果正确的解读，明确产前诊断的目的及意义2、不同孕周取材与实验技术实施及需明确诊断染色体变异的准确性与局限性3、胎儿超声检测的重要性4、产前诊断结果的评估（CNV、嵌合性核型）建立严格的临床资料管理制度建立有效的随访制度 NIPT临床运用总结•孕前期或早期相关筛查（夫妇核型，地贫，遗传病史，超声）•孕周的掌握•早孕B超异常(NT,结构异常)•适应症掌握•相关技术介绍•知情同意原则•充分沟通•结果评价及明确诊断技术的运用•异常结果告知知情同意•随访体系建立（时限内容资料整理与保存） 卫生行政主管部门落提实出政建策议测序公司合作医疗机构研究机构新技术、工具研发产前诊断中心技术运用、人才培养PGD？PGS？遗传学评估多学科整合门诊规模？？胎儿医学胎儿超声MRI胎儿结构异常的产前检查 thanks