益生菌连续代1000代过程.doc

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1、益生菌在常规培养条件下连续传代1000代过程中稳定性研究摘要：以益生菌LactobacilluscaseiZhang为研究对象，通过观察该菌株在普通MRS培养基中连续传代1000代期间细胞形态、菌落形态、活菌数、浊度和菌株活力的变化对其稳定性进行了初步评价。结果表明，L.caseiZhang在1000代期间细胞形态与菌落形态没有发生变化；活菌数、浊度均和菌株活力随培养代数的增加呈现波动性变化，但波动幅度较小，总数基本维持不变。上述研究结果初步表明L.caseiZhang具有良好的稳定性，暗示其可用于产业化生产。关键词：益生菌；Lactob

2、acilluscaseiZhang；连续传代；稳定性StudyonthestabilityoftheprobioticLactobacilluscaseiZhangduringcontinuoussubculturinginnormalconditionfor1000generationsAbstract:Inthisstudy,weselectedprobioticLactobacilluscaseiZhangastheresearchobject,anditsstabilitywasassessedbymonitoringthecha

3、ngeofcellmorphology,colonymorphology,viablecounts,growth(OD600)andactivityduringthe1000generations.TheresultsshowedthatbacterialcellandcolonymorphologyofL.caseiZhanghadnochange,andtheviablecounts,growthandbacterialactivityofL.caseiZhangfluctuatedmildly.Inaword,L.caseiZhan

4、gwasstableduringlong-termcontiuoussubculturing,whichcanbefurtherappliedinindus-try.Keywords:Probiotic;L.caseiZhang;ContinuousSubculturing;Stability116Vol.41，No.112013(total276)ResearchPapers研究报告0引言益生菌是指通过摄入适当量从而对宿主产生有益作用的活性微生物，对人体主要具有免疫调节、调整肠道菌群、防止腹泻、降低粪便中某些酶活性及抗突变抗癌的医疗保健

5、作用[1-4]。通常益生菌都要经过严格的筛选，还要经过动物实验和人体临床实验的综合评价[5-6]。此外，它们还应具备优良的遗传稳定性能[7]。从微生物应用的角度来看，这也是菌株实现产业化生产的必备条件。益生菌LactobacilluscaseiZhang来源于草原蒙古族几前年流传下来的原生态发酵乳饮料酸马奶[8]。经过多年系统的基础研究，我们自主解决了其产业化的关键技术问题。本文通过观察该菌株在普通MRS培养基中连续传代1000代期间细胞形态、活菌数、浊度和菌株活力的变化对其稳定性进行了评价，以期为后续试验提供参考。1实验1.1材料1.1

6、.1菌株来源益生菌L.caseiZhang原始菌株（0代）是由内蒙古农业大学提供，LABCC编号IMAU10048。1.1.2试剂与仪器试剂：法国梅里埃合成无糖MRS培养基，纽西兰超特级脱脂乳粉，葡萄糖、盐酸、氢氧化钠、氯化钠、琼脂粉等常用试剂均为国产分析纯试剂。仪器：NSC-ⅡA-1200无菌工作台，恒温培养箱（LRH-500F），台式高速冷冻离心机（Eppendorf，5810R型），pH计（SJ-3F型），超纯水系统（MUL-9000），HITACHIU-2000型紫外可见分光光度计，HIRAYAMAHA-300M全自动高压灭菌器等

7、。1.2实验菌株的连续传代培养及培养代数计算将0代益生菌L.caseiZhang按体积分数为1%接种量进行长期连续传代培养至1000代。在每个传代周期（24h）内，菌体菌数约增长100倍，生长代数约为6.64代[9]。1.3细胞形态学观察在菌株L.caseiZhang连续传代过程中，培养至1000代时对菌株进行革兰氏染色、油镜观察、照相，观察培养周期末菌株细胞形态。1.4生长周期末活菌数变化在菌株传代过程中，每培养200代测定各个菌株在培养周期末（24h）的活菌数。样品经倍比稀释到合适梯度后，采用MRS固体培养基平皿倾注法，37℃厌氧培养

8、72h后计菌落总数，选取菌落数在30～300之间的平板作为活菌总数测定的指标。1.5生长周期末浊度变化在菌株传代过程中，每培养200代测定连续3天的培养周期末的培养液浊度。传代培养液用未接菌培