富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法.pdf

《富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、天津农业科学耐inAgriculturalSciences2014，20(3)：J·植物生理与生物技术富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法白沙如拉，庞磊，史树德，魏磊(内蒙古农业大学农学院，内蒙古呼和浩特010019)摘要：半日花(Helianthemumsoongoricum)属强旱生植物，其组织富含多糖和多酚等次生代谢物质，采用常规CTAB和SDS等方法提取的半日花基因组DNA由于含有多糖等杂质，无法进行PCR扩增和限制性酶切等试验，为此，在CTAB法的基础上进行了改进。第1步通过向植物组织CTAB提取液中添加

2、高盐和乙醇来沉淀部分多糖，第2步将获得的DNA粗提液，经过CTAB分离溶液沉淀、NaC1溶解、乙醇沉淀等方法，可有效去除半日花组织中的残余多糖等杂质，提取DNA的质量和纯度经凝胶电泳条带清晰、元降解、无多糖等杂质。PCR扩增和限制性内切酶的结果表明，通过改进的方法所获得的DNA，可以进行PCR扩增试验，扩增条带清晰，基因组DNA能被限制性内切酶完全酶切，该方法为后续半日花分子生物学研究奠定了重要基础。关键词：强旱生植物；半日花；基因组DNA；多糖；改进CTAB法中图分类号：Q943．2文献标识码：ADOI编码：10．3969

3、~．issn．1006—6500．2014．03．001GenomicDNAIsolationfromPolysaccharides—richHeliantheillUlllsoongoricumBAISharula。PANGLei。SHIShu—de。WEILei(CollegeofAgronomy，InnerMongoliaAgIicultureUniversity，Hohhot，InnerMongolia010019，China)Abstract：Helianthemumsoongoricumisastrongxero

4、philswithrichsecondarymetabolitesmaterialincludingpolysaccharide，polyphenolandpectinetc．．ItisdificulttoobtainthegenomicDNAfornextmolecularexperimentsusingthetraditionalmethodsi．e．CTABandSDS．InthisPaper，amodifiedextractinggenomicDNAmethodbasedontheclassicalCTABmetho

5、dwerecarriedout，whichcanremovepolysaccharide，polyphenolsandpectineffectivelythroughadded5mol·L一NaC1andabsoluteethanolinCTABlysedplanttissue，followingtheroughDNAsolutionprecipitatedby2％CTABseparatingsolutionandprecipitatedDNAredissolvedby1mol·L～NaC1．Finally，theDNAwa

6、sprecipitatedby95％ethano1．TheresultshowedthattheextractedDNAispurifiedasgelelectrophoresisshowclearandwholeband，indicatingtherewasnosignificantDNAdegradationintheextractionprocessandeliminatingtheinterferenceofpolysaccharideandpolyphenolsbasically．TheDNAobtainedcan

7、beamplifiedbyPCR，anddigestedbyrestrictionenzymeEcoRI，whichlaidanimportantfoundationforsubsequentmolecularstudyresearchonHelianthemumplants．Keywords：strongxerophils；Helianthemumsoongoricum；polysaccharides；genomicDNAextraction；improvedCTABmethod近年来，随着分子生物学技术的发展，以基因组D

8、NA沉淀含有多糖等粘稠胶状物而难于DNA为主要研究对象的保护遗传学在珍惜濒危溶解，严重影响所提取DNA的质量，以至于无法植物的保护和利用上得到了广泛应用[。相关研进行PCR扩增和酶切等反应。虽然已有一些富究结果证明，保护遗传学在濒危物种的保护方面含多糖多酚类物质植物的基因组DNA提取方法起