HIV-1 CRF01_AE毒株S68G对K65R突变株耐药性及复制适应性影响的研究

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1、分类号：R512.91单位代码：10159密级：公开学号：201520178硕士学位论文（硕士学术学位）中文题目：HIV-1CRF01_AE毒株S68G对K65R突变株耐药性及复制适应性影响的研究英文题目：TheimpactofS68GondrugresistanceandreplicationfitnessofK65RmutantsofHIV-1CRF01_AE论文作者：李胜佳指导教师：张旻教授学科专业：医学实验学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文HIV-1CRF01_AE毒株S68G对K65R突变株耐药性及复制适应性影响的研究Theimpact

2、ofS68GondrugresistanceandreplicationfitnessofK65RmutantsofHIV-1CRF01_AE论文作者李胜佳指导教师张旻教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科基础医学二级学科医学实验学研究方向艾滋病的耐药监测论文起止时间2016年3月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学硕士学位论文摘要目的：艾滋病（AcquiredImmuneDeficiencySyndrome,AIDS）是严重威胁人类健康的传染病，由人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodefici

3、encyVirus,HIV)引起，迄今仍无法根治。由于HIV-1的高度复制特性、高突变率以及高重组率造成了病毒的高度遗传变异性，将HIV-1分为不同的组、亚型、循环重组型（CirculatingRecombinantForms，CRFs）及独特的重组形式（UniqueRecombinantForms，URFs）。CRF01_AE是世界上发现最早的重组型HIV-1毒株，起源于非洲中部，目前已在全球范围内流行蔓延。CRF01_AE最早于上世纪90年代中期传入我国，自2007年以后，在我国各地及不同传播途径中的分布迅速上升，成为我国主要的HIV流行株。高效抗逆转录病毒

4、疗法（HighlyActiveAntiretroviralTherapy，HAART）可有效抑制病毒的复制，由于HAART的普及以及抗病毒药物种类的不断增加，大多数患者能够实现病毒学的完全抑制，然而仍有部分患者因出现耐药导致抗病毒治疗的失败。由于耐药株传播造成的感染还会引起未接受过治疗的感染者表现出对药物的抗性，因此国际艾滋病治疗指南建议在用药前和药物治疗中均进行耐药监测。基因型耐药检测是目前检测HIV耐药性最常用的方法，由于主要流行B亚型毒株的发达国家率先开展抗病毒治疗和耐药研究工作，对B亚型毒株耐药规律的研究远比其他亚型毒株更为深入。因此目前对于不同亚型和重

5、组型病毒的基因型耐药检测主要根据B亚型毒株所得出的研究数据。但迄今的研究数据已经提示亚型间基因多态性的显著差异可影响病毒的耐药通路，非B亚型毒株可能具有独特的耐药特征。此外，无论是体内实验还是体外实验，均曾出现过基因型和表型耐药结果的不一致，尤其是非B亚型病毒，进一步说明了根据B亚型病毒特点所总结出的耐药特征可能不完全适用于非B毒株。上述研究均提示，深入研究亚型特异性耐药突变规律，解析不同亚型毒株特定突变对抗病毒药物敏感性的影响及其耐药机制，对于科学预估临床耐药性、优化治疗方案至关重要。虽然CRF01_AE已经成为全球广泛流行的主要流行重组毒株之一，而且其耐药特

6、征也存在与B亚型毒株的不同之处，但目前对于CRF01_AE毒株的耐药性、耐药相关突变和病毒的适应性尚缺乏系统研究。本课题组前期研究发现CRF01_AE感染者在抗病毒治疗后，S68G突变率出现明显增幅且突变意义不明I中国医科大学硕士学位论文确。通过生物信息学软件分析各突变位点的相关关系，提示K65R与S68G之间存在显著的关联性。既往研究也提示K65R和S68G存在一定的相关性，但尚未明确S68G的意义。结合以上背景，本研究首先利用美国斯坦福耐药数据库进行深度挖掘，对比数据库中未接受抗病毒治疗和接受抗病毒治疗后S68G突变率的变化，以及不同亚型及重组型毒株中K65

7、R联合S68G的频率；其次，通过深度测序技术分析同一研究对象体内不同时间点的病毒基因序列，观察K65R与S68G发生的时序性变化及两者之间的关系，以明确S68G治疗前后突变率的增幅是否与K65R有关；接着，构建含CRF01_AE感染者pol基因的假病毒及感染性病毒，最大程度的保持CRF01_AE毒株基因序列的特征，通过表型耐药实验及生长竞争实验进一步探索CRF01_AE毒株中S68G与K65R的联合对病毒表型的影响，为科学解读CRF01_AE感染者耐药突变，合理应用抗病毒药物提供实验室依据。研究方法：1、研究对象截至2016年7月，中国医科大学附属第一医院红丝带

8、门诊共计2300名HIV