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《实验五总糖的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验五、总糖和还原糖的测定费林试剂比色法一、实验意义掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。二、实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2；+Na2SO4所牛成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，牛成可溶性的酒石酸钾钠铜：COOKCOOKh-c—ohH-C—0Cu(OHL+1=1/Cu+2H20・h-c-ohH-f-0COONaCOONa在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被述原糖述原
2、，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：COOK1CHOCOOK1COOHH—C—OH、1H—C—OH161H-C-OHCu+(CHOH)4+6H2O/1=6IH-C-OH+(CHOH)3+Cu2Oh2co31COONaCH.OH-1COONaCOOH反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氟化钾(黄血盐)反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。Cu2O+K4Fe(CN)6+H20^K2Cu2Fe(CN)6+2K0H(氧化亚铜)(淡黄色)滴定时以亚甲基蓝为氧化一述原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二
3、价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。三、试剂和器材1、试剂①碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CuSO45H2O)及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸憎水中并稀释到lOOOmL②碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH,溶于蒸憾水中，再加入4g亚铁氧化钾［iCiFe(CN)6〕，完全溶解后，用蒸憾水稀释到1000ml,贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。③0.1%葡萄糖标准溶液：准确称取l.OOOg经98〜100°C干燥至恒重的无水
4、葡萄糖，加蒸憎水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HC1(防止微生物生长)，用蒸丫留水稀释到1000mlo④6mol/LHCl：取250ml浓HC1(35%〜38%)用蒸丫留水稀释到500ml。⑤碘一碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馆水中。⑥6NNaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸憾水中。⑦0.1%酚駄指示剂。2、材料山芋粉3、器材屯热恒温水浴锅，调温电炉，250ml锥形瓶，滴定管。四、实验操作1、样品中述原糖的提取准确称取2g山芋粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馆水调成糊状，然后
5、加入50ml蒸憾水，混匀，于50°C恒温水浴屮保温20min,不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸憾水定容至刻度，即为还原糖提取液。2、样品中总糖的水解及提取准确称取lg山芋粉，放在锥形瓶中，加入6mol/LHCl10ml,蒸馆水15ml,在沸水浴屮加热0.5h,取出1〜2滴置于白瓷板上，加1滴I・KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后加入1滴酚駄指示剂，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml,过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，
6、定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。3、碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性洒石酸铜甲液和乙液各5.00ml,置于250ml锥形瓶中，加蒸憾水10ml,加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s,趁热以每2s1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：F=CXV式中：F—10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量，mg；C—葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml；V—标定时
7、消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mlo4、样品糖的定量测定(1)样晶溶液预测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于250ml锥形瓶中，加蒸馆水10ml,加玻璃珠3粒，加热使其在2min内沸腾,准确沸腾30s,趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时，以每2sl滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。(2)样晶溶液测定：吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml,置于锥形瓶中，加蒸馅水10ml,加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的
8、总体积少1ml的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s,趁热以每2s1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。五、结果处理还原時(以耄萄時计)％=——xlOOmxVx1000总轄(以耄萄時计)％=——xlOOwx^xlO
