木霉菌的发酵工艺及对黄瓜立枯病的生防机理研究

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1、河北农业大学硕士学位论文木霉菌的发酵工艺及对黄瓜立枯病的生防机理研究姓名：胡丹丹申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：董金皋;姜瑞波20050601摘要利用平板对峙法测定了长柄木霉(TrichodermalongbrachitumPdfailACCC30150、柠檬绿木霉(ZcitrinovirideBissett)ACCC30152、绿色木霉(zviridePersoonexFries)A、哈茨木霉(ZharzianumW1fai)B对13种植物病原真菌的抑菌作用。结果表明，这4株木霉菌具有较广泛的抑菌谱，除对玉

2、米黄斑病菌(Curvularialunata)抑菌率较低以外，对所测定的其余植物病原真菌都有较强的抑制作用。其中，长柄木霉ACCC30150对黄瓜立枯病菌(RhizoctoniasolaniKulhn)的抑菌作用最强，抑菌率达到95％。同时还发现，木霉可以快速竞争营养和空间，使病原菌生长受到抑制出现切线生长现象，且不同木霉菌对不同病原菌表现出不同的抑菌特征。将4株木霉与黄瓜立枯病菌对峙培养，在普通光学显微镜下可观察到长柄木霉ACCC30150和柠檬绿木霉ACCC30152菌丝能够沿着立枯丝核菌的菌丝平行生长，并且产生了附

3、着胞状分枝，最终使病原菌菌丝断裂．细胞质外泄、菌丝干瘪，但是却没有发现绿色木霉A和哈茨木霉B有类似的重寄生现象。此外，对于菌丝断裂过程首次提出“机械力拉断机制”的猜想。对4株木霉发酵液的性质进行测定，结果表明，4种木霉发酵终了发酵液呈中性偏酸性。其pH都为6,0，但ACCC30152发酵液pH值为正中性，4种发酵液颜色也不近相同。对菌丝体和发酵液中活性物质的粗提液进行活性测定，结果发现，只有长柄木霉ACCC30150有抗生活性，其抗生活性物质主要位于发酵液中，并可以能溶解到乙酸乙酯等有机溶剂中，对黄瓜立枯病菌有明显的拮抗

4、作用。本试验选用黄瓜立枯病菌作为所开发木霉生防菌的供试病原菌，将平板对峙试验作为初筛结果，对这4株木霉继续做温室防效试验。在温室中测定了不同木霉菌株、不同接入成分、不同接入时间的几种处理下木霉对黄瓜立枯病的防治效果。结果表明，温室条件下4株木霉对黄瓜立枯病的防治效果有一定的差异，与农药多菌灵相比较，防治效果也有一定的差异。其中长柄木霉菌ACCC30150能够有效的防治黄瓜立枯病，哈茨木霉B和柠檬绿木霉ACCC30152效果次之，分别达到了多菌灵防效的77．3％、63．6％和59．1％。同时表明，以带菌丝的木霉混合发酵液与

5、病原菌同时接入黄瓜幼苗的防病效果最好。此外，绿色木霉A对黄瓜有明显的促生长作用。通过对5种处理(T-R-、T+R．、T-R+、T+R+、T++IH)的不同时间段(接种后Oh、12h、24h、48h、60h、72h、84h、96h、108h)取样测定苯丙氨酸解氨酶(队L)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(cAT)4种与抗病有关的酶的活性。测定结果表明，这4种酶活性变化趋势在不同的处理中和不同的组织中呈现一定的规律性，分析发现，该木霉能诱导黄瓜幼苗的系统抗病性。通过对长柄木霉ACCC30150发酵

6、条件的研究，初步确定了其菌丝生长的最适碳源是葡萄糖，最适氮源是蛋白胨，最适碳氮比是4：l，最适温度是28"C，最适pH值是6．0，最适通氧状况是转速为250rpm，500mL三角瓶装液量为150mL；产厚垣孢子的最适碳源是葡萄糖，最适氮源是蛋白胨，最适碳氮比是3：2，最适温度是28"(2．最适pH值是5．0，最适通氧状况是转速为250rpm，500mL三角瓶装液量为150mL。关键词：木霉；黄瓜立枯病；生物防治；作用机制：发酵StudyonFermentationandActionMechanismofTrlchoder

7、maAgainstRhizoctoniasolaniSpecialth：PlantpathologyMastercandidate：HuDall-danSupervisor：DongJin-gaoABSTRACTInhibitioneffectsofTrichodermalongbrachitumACCC30l50．7=citrinovirideACCC30152．7=virideAandZharziahUmBweretestedagainstmirteenplantpathogensbydualcultureonpot

8、atodextroseagarPetriplates．Theresultsshowedthatthesefourstrainshadwidcinhibitingspectrumsandstrongerinhibitionabilitiesagainstother12kindsofpathogensexceptforC