生物技术制药04医药生物制品

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1、第四章  医药生物制品第一节  医药生物制品的免疫学基础第二节医药生物制品的基本概念第三节医药生物制品的一般制造方法第四节重要的医药生物制品第一节医药生物制品的免疫学基础Ⅰ、免疫学检测体液免疫测定法细胞免疫测定法药物(免疫分子)的免疫测定法一、体液免疫测定法1、体液免疫测定法的原理又称血清学检查法,建立在抗原抗体反应特异性的基础上。抗原与其相应的抗体相遇,将发生特异性结合,在体外的实验条件下,会出现凝集、沉淀、补体结合、溶解、中和等反应。各种微生物的鉴定、生物体内各种大分子物质、细胞表面分子、各种半

2、抗原物质的测定。2、体液免疫测定法的应用⑵用已知的抗原去测定未知的抗体⑴用已知的抗体去鉴定或测定未知的抗原<窗口期>有些疾病在感染早期,人体内已经有病毒存在,但抗体还未产生,或产生量极少检测不出来,这个时期就称为窗口期。3、抗原抗体反应的特征⑴高度特异性(二抗的含义?)⑵可逆性(分子表面的结合)⑶可见性(合适的分子比例)⑷反应分为两个阶段(特异性结合-快、出现可见反应-慢)4、影响抗原抗体反应的因素⑴电解质(生理盐水作为缓冲液)⑵酸碱度(PH6~8)⑶温度(37℃)5、常见的抗原抗体反应⑴凝集反应细

3、胞性或颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在下,将出现细胞或颗粒的凝集现象称为凝集反应。抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。例如:ABO血型的测定!可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在下,可出现肉眼可见的沉淀现象称为沉淀反应。反应中的抗原称为沉淀原,抗体称为沉淀素。⑵沉淀反应例如:免疫扩散或免疫电泳的抗体组成、含量!⑶补体参与的反应①溶血和溶菌反应②补体结合反应待检系统:已知抗体与待检抗原/已知抗原与待检抗体指示系统:绵羊红细胞和溶血素补体:新鲜豚鼠血清结果判断:不溶血——阳性;溶血——阴性抗体使相应的毒素的毒

4、性消失的试验称为中和试验。中和试验常用于毒素的鉴定。⑷中和试验⑸免疫标记测定技术是指用酶、荧光素或放射性同位素等标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。用于定性、定量或定位检测标记物的敏感性+抗原抗体反应的特异性酶联免疫吸附分析法免疫荧光技术放射免疫测定法酶联免疫吸附分析法①基本原理②关键技术③ELISA的常用方法④ELISA的应用间接法双抗体夹心法竞争法①基本原理通过酶标记技术,将抗原抗体反应的特异性和酶催化作用的高效性相结合

5、,利用酶反应底物的颜色变化来判断结果。②关键技术:Ⅰ固相包被技术Ⅱ酶交联技术常用聚苯乙烯微量反应板:Ⅰ固相包被技术样品量少使用方便重复性好优点:Ⅱ酶交联技术常用的酶:辣根过氧化物酶(HRP)碱性磷酸酯酶(AP)交联方法:戊二酸法、过碘酸法酶反应底物显色变化测定波长/nmHRPAP邻苯二胺邻联甲苯胺对硝基苯磷酸酯黄色405桔红色492蓝色425③ELISA的常用方法Ⅰ间接法Ⅱ双抗体夹心法Ⅲ竞争法(测定抗体)(测定抗原)(定量测定)Ⅰ间接法(用于测定抗体)包被加酶标抗体洗板加显色底物判断结果加样洗板Ⅱ

6、双抗体夹心法(测定抗原)SandwichELISAAddsubstrateandmeasurecolorAntibodycoatedwellAddantigenAddenzymeconjugatedsecondaryantibodyⅢ竞争法(定量测定)YYY待测管EEEYYYE样品▲▲▲▲▲▲YYYE▲▲▲▲▲▲▲参考管YYYEEEYYYEEE▲▲▲▲▲▲▲YYYEEE▲▲▲▲▲▲酶标抗原不加样品底物各种微生物的鉴定、生物体内大分子物质、细胞表面分子的测定。④ELISA的应用Ⅱ用已知的抗原去测定未

7、知抗体Ⅰ用已知的抗体鉴定未知抗原Ⅲ药物的免疫测定例:胰岛素、干扰素等1、T细胞总数的测定2、T细胞亚群的测定3、淋巴细胞转化试验4、NK细胞活性测定5、IL-2的测定二、细胞免疫测定法三、药物的免疫测定法Ⅱ免疫学预防一、获得免疫力的方式自然获得性免疫人工获得性免疫人工自动免疫:人工被动免疫:给机体接种抗原,使机体主动地建立起针对该抗原的免疫应答。给机体注入特异性抗体或细胞因子等,使机体获得特异性免疫。人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自动免疫人工被动免疫免疫材料抗原(菌苗、疫苗、类毒素)抗体或细

8、胞因子免疫力出现时间晚(1~4周)早(立即)免疫力维持时间长(数月~数年)较短(2周~数月)用途主动用于预防主要用于治疗或紧急预防二、人工自动免疫用生物制品由细菌菌体成分(或螺旋体)制成的生物制品称为菌苗;由病毒(或立克次体)制成的生物制品则称为疫苗。1、菌苗、疫苗用无毒或充分减毒的病原微生物制成活菌液的生物制品称为活菌(疫)苗。⑴活菌(疫)苗⑵死菌(疫)苗将病原微生物经人工培养增殖后收集菌体,用化学或物理方法将其杀死或灭活后制成。活菌(疫)苗与死菌(疫)苗的比较活菌

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