《DNA连接酶—“分子缝合针”》进阶练习（三）

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1、连接酶—“分子缝合针”—进阶练习一、单选题.下图所示为某质粒被切割后得到一个线性载体，经过末端核苷酸转移酶作用将多个相同的脱氧核苷三磷酸（或或或）连续加到切割后的两个黏性末端上。相关说法不正确的是（）.末端核苷酸转移酶作用时不需要模板链.末端核苷酸转移酶的作用是催化形成磷酸二酯键.末端核苷酸转移酶的作用特点与连接酶相同.该技术的重要意义是防止线性载体自身环化.下列说法正确的是().原生质体的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成.用酶解法获得原生质体后，可以用观察细胞的有丝分裂实验对其活力进行检查连接酶能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板.人的胰岛

2、素基因可以插入到奶牛的染色体上，是因为它们的都是有规则的双螺旋结构，而且的基本组成单位相同.下图为分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶．聚合酶．连接酶．解旋酶作用的正确顺序是.①②③④  .①②④③  .①④②③  .①④③②二、识图作答题.据英国《每日邮报》报道，荷兰的科学家通过基因工程技术用蛛丝蛋白制成了一种高强度人造皮肤，这种“皮肤”甚至能够抵御子弹的射击而不被穿透。实验中，研究人员首先通过转基因技术培育出了一种山羊，这种山羊能够生产出具有蛛丝蛋白的羊奶。在羊奶中加入一种特殊的溶剂后，就能提取到大量的蛛丝纤维。这种蛛丝纤维甚至比著名的用于制作“防弹背心”的凯

3、夫拉尔纤维还结实。将这些纤维纺纱编织就能制成所需要的“超强布料”。()上述转基因山羊培育过程中，肯定用到的工具酶有。()为使蛛丝蛋白基因转入山羊细胞后能够在乳腺细胞中表达，可将目的基因与等调控组件结合。目的基因的表达载体可以用法导入山羊的细胞中。.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图、图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（）一个图所示的质粒分子经Ⅰ切割前、后，分别含有、个游离的磷酸基团。（）若对图中质粒进行改造，插入的Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越。（）用图中的质粒和外源构建重组质粒，不能使用Ⅰ切割，原因是。（）与只使用相比较，使用Ⅰ和Ⅲ两种限制酶同时处理质粒

4、、外源的优点在于可以防止。（）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶，若两两相连，则连接产物中有哪几种况?。参考答案【答案】            .（）限制酶和连接酶（）乳腺蛋白基因启动子 显微注射 受精卵.（）  （）高 （）Ⅰ破坏质粒上的抗性基因和外源中的目的基因 （）质粒和含目的基因的外源片段自身环化   （）连接 目的基因自身相连的、运载体自身相连的和目的基因与运载体相连【解析】.【分析】本题考查基因工程的知识，意在考查学生对相关知识的理解，把握知识间的内在联系，形成知识间的网络结构能力。【解答】.末端核苷酸转移酶的作用将多个相同的脱氧核苷三磷酸连续加到

5、切割后的两个黏性末端上，不需要模板链，正确；.末端核苷酸转移酶的作用是催化形成磷酸二酯键，正确；.末端核苷酸转移酶的作用特点是形成磷酸二酯键，连接酶的作用是通过磷酸二酯键将两段链连起来，两者的作用特点不相同，错误；.该技术的重要意义是防止线性载体自身环化，正确。故选。.【分析】本题考查生物工程的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。【解答】.原生质层的结构是由细胞膜、液泡膜以及这两层膜之间的细胞质组成，而原生质体指的是植物细胞去掉细胞壁以后的成分，错误；.酶处理后细胞可能会失去活性，并且观察有丝分裂实验中观察的是已死的细胞，无法进行活力检查，错误；聚合酶

6、能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键，且需要模板，错误；.人的胰岛素基因可以插入到奶牛的染色体上，是因为它们的都是有规则的双螺旋结构，而且的基本组成单位相同，在结构和化学组成上都是相似的，正确。故选。.【分析】本题考查与相关各种酶的相关知识，意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。【解答】限制性内切酶能够识别分子中某种特定核苷酸序列，并在特定的切点上切割分子，使磷酸二酯键断开，为图①；聚合酶主要是连接单个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，在复制中起作用，为图④；连接酶通过形成磷酸二酯键，从而将两条片段连接起来，为图②；解旋酶是一类作用于氢键的酶

7、，能够使氢键断开，把双链打开，为图③。综上所述，正确，错误。故选。.【分析】本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间内在联系的能力。【解答】（）转基因山羊培育过程中，需要准确切割的手术刀限制酶和将片段再连接起来的缝合针连接酶。（）要使蛛丝蛋白基因转入山羊细胞后能够在乳腺细胞中表达，构建基因表达载体时，需要将目的基因与乳腺蛋白基因启动子、标记基因和终止子等调控组件结合。将目的基因表达载体导入动物细胞最有效的方法是显微