艾滋病检测技术新进展

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1、艾滋病检测技术新进展及其应用郭志宏浙江省疾病预防控制中心内容提要1.HIV急性期感染或窗口期感染检测（Ab/Ag联合检测和集合PCR）2.婴幼儿早期诊断（nestRT-PCR）3.快速检测策略及质控1、HIV-1持续流行：全球HIV流行和AIDS仍继续增加，尤其是MSM同性恋人群，多达50%HIV传播发生在疾病急性和早期，（流行病学意义）2、高病毒RNA水平：性传播感染仍具首位，生殖道HIVRNA水平相当于血液中HIVRNA水平。高病毒载量、独特的病毒特性以及缺乏中和抗体，急性期感染者感染性极高。VL>10Mcopies/mm33、极易垂直传播：怀孕妇女感染HIV非常常见，增加HIV垂直传播

2、的危险。2011年4月全国报告的HIV感染者（5560例）中，母婴传播占1.3%；AIDS病人（2806例）中，母婴传播占1.0%。公共卫生意义：HIV-1流行形势严峻为什么HIV急性感染（AHI）越来越受到重视？4、应尽早尽快进行诊断：HIV感染急性期，感染者无症状和流感样症状而经常漏检而误诊，感染者本人不知自己感染状态，极易在高危人群中传播5、应尽早进行人群干预：实时对感染者及其配偶、孕妇感染者及其婴儿进行干预，知晓感染状态，减少危险性行为；了解和干预复杂的性传播网6、应尽早进行病毒干预：在AHI时期进行可能的干预以限制HIV复制和整合入病毒潜伏池、（整合后不可治愈），早期抗病毒治疗的必

3、要性(转变观念)7、指导疫苗研究：基于急性期感染时期的传播性/奠基者病毒的特性8、建立人类自然模型：研究AHI个体，为详细了解人类HIV传播事件提供最好的机会公共卫生意义：早诊断、早干预、早治疗、降两率、指导疫苗研究为什么HIV急性感染（AHI）越来越受到重视？方法：前瞻性随访高危人群队列发现阳转感染者（MSM,IDU,SW,单阳伴侣）限制：1）前瞻性随访HIV阴性人群的巨额花费；2）在阳转时刻或接近阳转时难以找到研究对象，难以采集到急性期血清阴性病毒血症期峰值的样本；（美国国防部联手NIH已经启动疫苗免疫性队列研究RV217，每周二次检测HIVRNA，试图发现AHI；我国十一五重大专项也启

4、动了急性期感染的研究）前瞻性队列研究：高危人群横断面研究：普通人群血液中心通常使用集合（6-96份血浆）NAT筛查，阳性集合拆分并检测出个体感染者，使用病毒特异性“区别”NAT检测确认，阳性者纳入转诊和报告系统美国北卡卫生部门制定和实施了全州所有公共HIV检测点筛查AHI规划，对所有抗体阴性样本进行集合NATRNA检测。及时转诊、咨询、治疗和前瞻性研究如何发现HIV急性感染AHI？RNA+Ab-P24+Ab-血清阳转后的方法RNAp24Ab血清阳转抗体检测临界值特异性抗体比例时间反应指标感染血清阳转前的方法怎样检测HIV-1早期感染?从感染HIV到抗体呈阳性反应这段时间血浆中含有高浓度HIV

5、RNA有很高的传染性现在普遍认为2周～3个月,个别案例达6个月。HIV血清阳转窗口期HIV感染各种检测方法的窗口期HIVAb检测（第三代试剂）：窗口期约28天HIVAb/Ag联合检测（第四代试剂）：窗口期约15天核酸检测：窗口期约10天病毒载量值范围为3.84~6.84Log10Copies/mL；28例窗口期病例，病毒载量百万级有10份（35.71%）；十万级9份（32.14%）；万级的样品7份（25%）；万级以下的样品2份，占总样品数的7.14%。窗口期感染者的病毒学特征WB条带WB不确定RNA阳性p2426(65%)7(26.9%)p24+gp1609(22.5%)3(33.3%)p2

6、4+p174(10%)4(100%)p24+p551(2.5%)1(100%)合计401540份WB不确定样品WB条带HIV急性期感染或窗口期感染检测方法1.Ab/Ag联合检测:ELISA2.HIVRNA检测:集合PCRHIVAb/Ag联合检测检测早期HIV感染的效果与单独HIV-1抗原的试剂相当与RT-PCR方法相比，平均滞后时间是大约3.23天与第三代抗体试剂相比，窗口期缩短了1.56到5.32天检测献血员的特异性是99.80%第四代试剂的敏感性和特异性均有所提高HIVAb/Ag联合检测试剂的原理HIVAg检测：HIVAg固相血清/血浆结合物1/结合物2HIV1Ab:抗p24单抗……….

7、.…生物素标记的抗HIV单抗……..亲和素标记的过氧化物酶结合物TMB/H2SO4PHIVAb检测:IgG,IgA,IgM固相血清/血浆稀释液/结合物2HIV1Ag:gp160重组蛋白………………………………..gp41多肽过氧化物酶结合物功能性保守多肽………………….....................功能性保守多肽过氧化物酶结合物HIV2Ag:gp36多肽…………………………………..gp36多肽过氧