血清mir-1233对肾细胞癌诊断意义

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1、MicroRNAsinRenalCellCarcinoma:DiagnosticImplicationsofSerummiR-1233Levels血清miR-1233对肾细胞癌诊断意义LenaM.Wulfken1RudolfMoritzCarstenOhlmann,,,StefanHoldenriederVolkerJung,FrankEdwinHerrmannGiselaWalgenbach-Bru¨nagelBeckerAlexandervonRueckerStefanC.Mu¨ller肾癌病理类

2、型：1．透明细胞癌(clearcellrenalcarcinoma)为最常见的类型，占肾细胞癌的70%~80%。2．乳头状癌(papillarycarcinoma)占肾细胞癌的10%~15%。包括嗜碱性细胞和嗜酸性细胞两个类型。3．嫌色细胞癌(chromophoberenalcarcinoma)在肾细胞癌中约占5%。　　肾癌的类型还包括集合管癌（collectingductcarcinoma）和肾癌未分类（renalcellcarcinoma,unclassified）。肾癌无论体积大小，约80%的患

3、者早期可无任何症状，只是在普查和因其他原因作体格检查或B超检查时才被发现其肾脏有占位病变或触摸到腹部包块。有些患者肾脏原发癌灶很小，无泌尿系或肾内症状，却首先表现出远处转移癌的症状。如发现患者腋下、腹部肿块，为找原发病灶才发现为肾癌。所以及时的了解肾癌症状是非常重要的。但是目前还未发现用于诊断肾癌的血清标志物。已有研究发现在癌细胞中微小RNA表达水平发生了改变，因此微小RNA有可能作为癌症患者的诊断或预后的标志物，我们的研究旨在分析肾细胞癌患者循环血清中微小RNA的水平变化。miRNA是一类长约19~

4、24nt的非编码单链小RNA分子,在动物中,绝大多数miRNA可以通过与靶基因3′UTR区互补结合,抑制靶基因翻译成蛋白质,进而在细胞、组织或个体水平上影响生物体的生长发育,并参与多种疾病过程。已有研究证实正常组织和肿瘤组织中miRNA表达明显改变.miRNA在不同肿瘤中具有特定的表达模式.这些特点也使miRNA有可能成为肿瘤诊断的新的生物学标记和治疗药物作用的靶标。MethodsObjectives：迄今为止，还没有对肾癌患者循环中微小ＲＮＡ水平进行研究的报道。我们设计了用低密度芯片（TaqManL

5、owDensityArray）技术检测并且用传统的real-timePCR在一独立组中证实了最有趣的microRNAs，Participants：我们收集了肾肿瘤患者的血清，包括肾细胞癌和良性肾肿瘤（大嗜酸粒细胞瘤oncocytoma，血管肌脂肪瘤Angiomyolipoma），选取了非恶性疾病的手术患者作为对照组，表１，我们收集来自ＵＫＢ、ＵＫＳ、ＵＫＳ三所大学泌尿外科２００５至２０１１这些患者术前的血液样本。从血液样本中分离出血清。Wealsoanalyzedformalin-fixed,para

6、ffinembeddedtissuefromsixpatientsstoredinthearchivalfilesoftheInstitutfurPathologieattheＵＫＢRNAisolation：提取血清中ＭｉＲＮＡ提取病理组织切片中的ＭｉＲＮＡLowDensityArrays：QuantitativeReal-TimePCR：Statisticalmethods：real-timePCR得出的数据用SDSsoftwarev2.4分析，microRNA水平用RQManagerv1.2.1计

7、算出,数据分析用DataAssistv2.0，数据统计用SPSS17.０软件，microRNA水平的特异性、灵敏性用ＲＯＣ分析，ResultsPhase-1:标志物的发现载样缓冲液作用：1）增大样品密度，以确保DNA均匀进入样品孔内为了使样品能沉入胶孔，需加入适量的蔗糖、聚蔗糖400或甘油以增加比重2）使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利3）含有指示剂，在电场中能以可预知速率向阳极泳动指示剂电泳过程中，常使用一种有颜色的标记物以指示样品的迁移过程。核酸电泳常用的指示剂有两种：溴酚蓝(bromophe

8、nolblueBb)呈蓝紫色，二甲苯青蓝(xylenecyanol，Xc)呈蓝色。0.5×TBE做电泳液时溴酚蓝的泳动率约与长300bp的双链DNA相同，二甲苯氰（蓝）则与4kbp的DNA相同。所以根据分离样品中DNA分子的大小，可以参照指示剂Bb和Xc的迁移情况决定是否停止电泳．3琼脂糖(Agarose)凝胶的制备制好的凝胶水平电泳槽A通常将溴化乙锭EB(0.5微克／毫升，母液10mg/ml）)渗人到凝胶和电泳缓冲液中。B也可使凝胶在不加溴化乙锭时进行