高效液相色谱仪使用与操作规程学生用

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1、高效液相色谱仪使用与操作规程Agilent1100HPLC江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室第一步第二步第三步第四步准备开机注意事项清洁关机步骤江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室Agilent1100系统组成本系统由溶剂输送泵（四元泵，标配真空脱气机）Rheodyne7725i手动进样阀柱温箱VWD紫外-可见检测器Agilent1100色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室第一步、准备1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气2

2、0min。2、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室接通电源，依次开启不间断电源、真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。第二步、开机江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室一）参数设定1、波长设定：2、流速设定：3、流动相比例设定：4、梯度设定：江西中医学院

3、现代中药制剂教育部重点实验室二）更换流动相并排气泡1：将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；3：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为0ml/min；4：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。5：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室三）平衡系统用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过

4、则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室四）进样1、进样前按检测器[balance]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室五）谱图的判断及结果计算1、系统适用性实验：①分离

5、度：一般应≥1.5。②重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过1%。③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。④拖尾因子：0.95＜T＜1.05⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。⑥RSD：精密度＜3%。2、结果计算①外标法：②内标法：江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室第三步、清洗管路及关机1、分析完毕后，先关检测器，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15～30分钟，最后用甲醇保留色谱柱，特殊情况应延长冲洗时间

6、。2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。3、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室第四步、注意事项二、样品1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；一、流动相1、

7、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室第四步、注意事项三、色谱柱1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等

8、；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、