《南医大微免实验二》ppt课件

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1、实验内容录像：淋转、E花环介绍：免疫学检测技术（书229）示教：淋转、E花环单扩、双扩、火箭电泳操作：对流免疫电泳、玻片凝集淋巴细胞转化试验转化百分率正常值为70%左右分裂相：即染色体型母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少示教片E玫瑰花环试验T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。示教片一、抗原抗体反应的原理1、基础：抗原决定簇—

2、—抗体的互补决定区2、特点：特异性可逆性比例性阶段性二、抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、温度3、酸碱度三、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术凝集反应概念：抗原+抗体凝集团块直接凝集：颗粒性抗原+抗体凝集团块玻片法、试管法间接凝集：可溶性抗原包被于载体+抗体凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体+抗原凝集团块协同凝集：抗体结合金葡菌SPA+抗原凝集团块沉淀反应概念：可溶性抗原+抗体沉淀物单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向琼脂扩散、对流免疫电泳

3、：抗原分析、抗原定性试验等抗原、抗体同时扩散（自由、定向）单向琼脂扩散单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量单向定量免疫电泳（火箭电泳）将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比

4、。敏感度与单扩相仿，但需时较短。双向琼脂扩散在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分对流免疫电泳材料电泳仪缓冲液琼脂板1块/2人，打孔器2个/组，抗AFP血清——已知AbAFP阳性血清——阳性Ag对照阴性血清——阴性Ag待检血清：标本1——未知Ag标本2——未知Ag对流免疫电泳打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。加样：抗AFP血清加于抗体孔内；

5、病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电30分钟。观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。对流免疫电泳方法打孔加样电泳35min－＋AgAbAgAb4~5mm4~5mm>5mm>5mm阴性阳性标1阴性标2阳性对流免疫电泳结果判定：在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。直接凝集反应——玻片凝集材料：玻片1张/1人，1号、2号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环方法：取生理盐水3～4环，菌落1～2环，后加血清2环轻摇玻片

6、，1～2分钟后观察结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片扔在后面的玻片缸里*消毒水泡手生理盐水＋1号菌落生理盐水+1号菌落＋诊断血清实验报告五张图：淋转、E花环、单扩、双扩、火箭电泳原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集（结果可用图示）