《发酵工程实验指导》ppt课件

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1、1XinZhangSchoolofMarineScienceDepartmentofFoodScience&TechnologyNingboUniversity发酵工程实验张鑫宁波大学海洋学院食品科学与工程系6251862乳酸菌的功能与应用价值抗菌，防腐，抗氧化，微生态（益生菌等）发酵保健食品（酸奶）；发酵代谢产物：有机酸，胞外多糖，抗菌肽，等；果蔬发酵（酸菜等）；环境废物转化，环境保护；等。乳酸菌的应用乳酸菌的功能3发酵工程的研究内容构成★工业微生物（生产菌株）的分离与筛选；★菌株改造（菌种选育）

2、★培养基制备技术；★发酵过程控制与优化；★产物的分离与纯化4第一部分：乳酸菌的分离、筛选与保藏第二部分：乳酸菌的培养与发酵测定附上：实验原始记录实验一：实验准备实验二：乳酸菌的分离与筛选实验三：菌种培养与保藏实验四：乳酸菌的发酵培养实验五：乳酸菌发酵测定与产物分析一、实验目的与意义及原理等二、材料与方法（或步骤）三、结果与分析问题回答实验报告撰写基本格式撰写完成实验报告（上交材料）实验内容设计5实验二时间安排周XX培养基制备；分离：划线分离；稀释分离选菌落，接入斜面培养基（标记），培养；保存6实验乳

3、酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定产酸变化注意点：新保存的菌株可直接接种，不必再活化。菌种移接至发酵三角瓶，培养(E2)（细胞生物量g/L：离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH变化：酸度计）发酵产物乳酸定性分析(E3)（薄层层析法）总实验流程采样分离(E1)乳酸菌菌株7实验一：培养基制备与器材准备每组内容每人倒1个平板用于划线分离做一套稀释倒平板，1个稀释度倒平板1个斜面培养基每人1支，第一部分MRS培养基200ML，营养琼脂30ML，无菌水试管4支（9ML），无菌移液管5支（1ML），注意：碳酸钙

4、按比例混合（MRS培养基200ML加5克）；培养基可几个组合并配制。发酵模块：共6个组，每3个组配600ML，营养琼脂一个班配1瓶。8分离得到的乳酸菌菌株（编号）菌落观察生理生化特性（略）形态鉴定（略）采样稀释倒平板编号，斜面培养与保存（通过产酸特性直接鉴定）实验二：乳酸菌的分离与培养第一部分9实验三乳酸菌菌种的培养与保藏分离得到的乳酸菌菌株（编号）斜面移接与培养(每一株）1株保藏1株待以下实验用注意点：注明菌种编号与日期；如Lcd131,Lcd132；（例：陈丹，第一组第3位同学）第一阶段结束，总

5、结安排一周完成10时间安排（制药班级，21人）周三培养基制备；分离：划线分离；稀释分离周五选菌落，接入斜面培养基（标记），培养；配制发酵培养基；（每个菌株接种2瓶平行实验）下周一下周三接种发酵培养基（标记），每个菌株接种2瓶。开始记录时间。（16至24h内检测一次）发酵结束，样品检测，乳酸薄层层析法测定。（周二）（周四）（周四）11实验乳酸菌菌株斜面移接活化细胞生长测定（自选）产酸变化注意点：新保存的菌株可直接接种，不必再活化。实验四乳酸菌培养与发酵测定菌种移接至发酵三角瓶，培养（细胞生物量g/L：

6、离心测菌体重量；混浊度描述）（测定pH变化：酸度计）发酵产物乳酸定性分析（E3）（薄层层析法）总实验流程第二部分12发酵培养基的配制接种3环培养瓶包扎方法说明13细胞生长的测定细胞湿密度：单位体积(ml)发酵液菌体的重量g（湿重）;方法：取一定量(ml)发酵液，经离心去除上清液，菌体称重。细胞浓度：单位体积(ml)活细胞数(cfu)，单位:cfu/ml方法：取一定量(ml)发酵液，经适当稀释后。倒平板培养计数，再由菌落数与稀释倍数的积。光密度（OD）：反映细胞的混浊度；方法：由分光光度计在一定

7、波长下测定吸光值。14分析结束以后每一组清洗各自的实验物品，包括斜面菌种等。请同学注意：发酵液预处理可直接取发酵清液，调pH至3左右因培养结束；最后一次分析检测不用无菌操作！15实验五乳酸菌发酵产物（乳酸）的定性分析---薄层层析法方法流程1.发酵液预处理可直接取发酵上清液，调pH至3，另用自然pH做对照；2.划线及点样时，不可将薄层刺破，点样斑点直径不超过2mm，重复点样时要在同一位置。每次点样后适当吹干。3.显色时，注意喷雾均匀。4.实验数据处理：记录显色点与点样点间的距离。发酵液预处理展

8、开系统饱和点样展开显色操作注意事项记录计算，等16展层溶剂：正丁醇：甲酸：水=80：15：5（V/V/V）；展开系统的饱和：预先取适量配制好的展开剂注入层析缸一边，将已点样的的薄板也放入层析缸的另一边，密闭层析缸15~20min，使展开液蒸汽饱和层析系统展开：将薄板移至有适量展开液的层析缸一边展开；显色：3%的溴甲酚绿酒精溶液喷雾，再用热风吹干，注意：显色液喷雾要足够。显色时间要充分。1、描述分离效果（作图或照片显示）；2、计算Rf值；3、分析实验结果及误差原因。（请