《花粉培养》ppt课件

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1、花粉培养安科院园艺121班这张已隐藏,播放时不可见^_^花粉培养也叫小孢子培养，是指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行的离体培养技术包含花粉的花药花粉培养产生植株的途径花粉脱分化胚状体愈伤组织再分化植株植株花粉培养的优点花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含有因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体细胞植株由于起始材料是小孢子，获得的材料总是纯合的，不管它是二倍体还是三倍体小孢子培养可观察到由单个细胞开始雄核发育的全过程，是一个很好的遗传与发育研究的材料体系由于花粉能均匀地接触化学的和物理的诱变因素，花粉是

2、研究吸收、转化和诱变的理想材料一、分离花粉的方法1.自然释放法2.研磨过滤收集法3.剖裂释放法1.自然释放法将花蕾进行表面消毒后，无菌条件下取出花药，放在固体或液体培养基上培养，花药会自然开裂，将花粉散落在培养基上。然后将花药壁等去除，即可进行花粉培养。花蕾消毒灭菌花药固体培养基液体培养基裂开，花粉散落移走花药花粉培养花粉散落过滤离心浓缩接种培养操作简单，但效率低2.研磨过滤收集法将花蕾表面消毒后，放入含培养基或分离液的无菌研磨器中研磨，使花粉释放出来，然后通过一定孔径的网筛过滤、离心，收集花粉并用培养基或分离液洗涤，然后用培养基将花粉调整到理想的接种密度，移入培养皿进行培养。

3、消毒花蕾无菌研磨器研磨花粉+碎片混合物花粉滤液离心花粉沉淀物洗涤花粉培养筛网过滤3.剖裂释放法这一技术需要借助一定工具剖裂药壁，使花粉释放出来，而不是自然释放。zhelidewenziyidianyiyidoumeiyouyinweikongbaichutaiduolesuoyijiuxiedianshenme二、花粉培养方法1.液体浅层培养2.平板培养法3.看护培养法4.微室悬滴培养法5.条件培养法1、液体浅层培养分离的小孢子经洗涤纯化，调整到所需浓度，根据培养皿的大小，适量加入培养皿内进行培养。待愈伤组织或胚状体形成后转移到分化培养基或胚发育的培养基上使其生长。zhelid

4、ewenziyemeiyouyiyiyinweizhaobudaoheshidetupiansuoyizhinengxiexiewenzile2、平板培养法将分离的花粉用液体培养基稀释或离心浓缩到最终接种密度的2倍，把含0.6%到1%的琼脂的培养用固体培养基加热熔化后，冷却到35℃，置于恒温水浴锅中保持这个温度不变。然后将这种培养基与花粉培养液等量混合，迅速注入并使之铺展在培养皿内。用封口膜把培养皿封严，最后将材料放在25℃下进行暗培养，诱导产生胚状体或再生不定芽，并进而分化成小植株。稀释花粉悬浮液离心浓缩含有2倍培养密度的花粉悬浮液等体积混合含有单倍培养密度的花粉培养液固培加

5、热熔化冷却至35℃加封口膜25℃暗培养花粉平板培养示意图3、看护培养法将完整的花药放在固体培养基上，然后将滤纸片放置在花药上面，一会滤纸就被湿润，然后迅速将花粉放置在滤纸片上，进行培养。对照是把花粉粒直接放置在固体培养基上，其它操作相同。4、微室悬滴培养法把花序取下，表面消毒后用塑料薄膜包好，静置一夜，待花药裂开、花粉散出，制成每滴含有50到80粒的花粉悬浮培养基，然后放在微室内进行悬滴培养。花药消毒静置一夜花药裂开花粉散落收集悬浮悬浮液50~80粒/滴1滴无菌载玻片加石蜡“围墙”两侧加石蜡油，放盖片形成“支柱”盖片架于“支柱”之上形成“屋顶”微室制作方法5、条件培养法概念：指

6、在合成培养基中加入失活的花药提取物，然后接入花粉进行培养的一种方法。由于失活的花药提取物中含有促进花粉发育的物质，所以加入花药提取物有利于花粉培养成功。花药+培养基花粉萌动1周取出花药，沸水杀死细胞研磨离心上清液无菌过滤加入培养基接种花粉培养花粉植株培养步骤XieXie