隐球菌实验室检测

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1、隐球菌的实验室检测杨启文北京协和医院IFD的诊断和治疗2微生物学证据-临床诊断镜检：以下任一病灶处查见丝状菌：痰、肺泡灌洗液、支气管毛刷、窦道析出物培养：以下任一病灶处查见丝状菌：肺泡灌洗液、支气管毛刷、窦道析出物抗原检测：G试验（血浆、血清）GM试验（血浆、血清、BALF、CSF）3微生物学证据-确诊镜检：无菌病灶处、病理切片培养：以下任一无菌病灶处培养阳性：CSF、组织、无菌病灶引流液、血（BALF、颅窦标本、尿中培养出真菌不能确诊）抗原检测：隐球菌抗原4实验室诊断方法直接镜检+组织病理真菌培养+鉴定血清学分子生物学涂片镜检隐球菌镜检KOH10

2、-20%：皮肤标本/痰革兰染色：多染为革兰阳性六胺银染色墨汁染色真菌镜检真菌镜检W7612CSF墨汁染色，W7612CSF革兰染色，隐球菌隐球菌真菌镜检某些真菌病可通过显微镜直接检查确诊如：卡氏肺孢子菌孢囊的检测错误的阳性结果也会出现：如：墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认为新型隐球菌脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆10真菌培养真菌培养12真菌培养-不同接种方法隐球菌培养培养基：SDA、脑心浸液琼脂（血平皿、巧克力平皿也生长）孵育温度：25-30度鉴定方法：生化鉴定，质谱鉴定，基因测序Page14抗真菌药物抗菌谱15抗原检测IFIs血清学检测方法真菌抗原、抗体、酶、代

3、谢产物标本类型真菌（除外接合(1,3)-β-D-葡聚糖血清、血浆菌和新型隐球菌）曲霉半乳甘露聚糖（GM）血清、BAL（CSF?）新型隐球菌荚膜多糖抗原血清、CSF念珠菌甘露聚糖、甘露聚糖抗体血清、CSF念珠菌烯醇酶血清念珠菌烯醇酶抗体、其它胞浆内抗原的血清抗体念珠菌D-阿拉伯糖醇血清曲霉、隐球菌甘露醇血清组织胞浆菌抗原血清、尿G试验(1,3)-β-D-葡聚糖mannoproteins(BG)真菌细胞壁成分b1,3b1,6>50%glucansPPL广泛存在于各种b1,3glucanchitinbilayersynthase真菌，除外接合ergosterol菌18G

4、试验检测范围检测底物：(1,3)-β-D–葡聚糖（BDG）诊断：侵袭性真菌感染（IFI）检测频率：2次/周真菌细胞壁成分：念珠菌，曲霉，镰刀菌，毛孢子菌，卡氏肺孢子菌，支顶孢属，酵母菌属不能检测：接合菌（毛霉、根霉）19EORTC/MSG2008G试验阳性—Probableinvasivefungaldisease除外隐球菌病和接合菌病（毛霉、根霉、犁头霉）DePauwB.,etal.,CID,2008,46:1813-21G试验：至少连续2次检测283名血液病患者，30名AML、MDS念珠菌血症患者，30名健康志愿者sensitivity97%，sp

5、ecificity93%连续≥2次G阳性，可提高特异性、PPV确诊或拟诊IFI，平均比出现临床症状和体征早10d；阳性患者中70%比临床表现早3天OdabasiZ,etal.21ClinInfectDis,2004,39:199-205G试验在隐球菌脑膜炎中有无诊断价值？Page22Rheinetal.,OFID,2014,1-7G试验诊断隐脑的性能评价隐脑病人中脑脊液BDG浓度为343（200-597）pg/ml，非隐脑病人中为37（23-46）pg/ml。Page23Rheinetal.,OFID,2014,1-7不同菌量的隐脑病人中的G试验敏感性Page24

6、Rheinetal.,OFID,2014,1-7CSF中BDG水平随抗真菌治疗快速下降抗真菌治疗隐脑(-)隐脑(+)Page25Rheinetal.,OFID,2014,1-7脑脊液BDG水平与病死率相关Page26Rheinetal.,OFID,2014,1-7G试验假阳性影响因素—方法学缺陷血液透析患者（纤维素膜）细菌血症、肝硬化、小肠结肠炎患者使用凝血因子、白蛋白、免疫球蛋白IV抗生素（β-内酰胺类：AMC/SAM…）•抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖•手术中使用棉纱垫、棉拭子等标本溶血、脂血、黄疸标本污染（床边消毒纱布，实验室环境粉尘）实验耗材：所

7、有枪头、试管、玻璃管均应无热原G试验：小结泛真菌marker，无法获知是哪种真菌高NPV，连续≥2次G试验阳性可提高特异性和PPV，2次/周进行监测IFI早期诊断假阳性高念珠菌定植不引起G试验升高动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效抗真菌药物治疗不影响其敏感性28GM试验诊断：侵袭性曲霉感染（IA）检测底物：半乳甘露聚糖曲霉细胞壁成分菌丝在组织中生长时释放热稳定可溶性：serum,BAL,CSF检测频率：2次/周交叉反应：马内菲青霉（多种青霉、拟青霉）、深红酵母、新型隐球菌、头地霉、顶孢霉、链格孢、郁金香葡萄孢、