1、Protein A 、Protein G 与抗体的结合1ProteinASepharose、rProteinASepharose亲和层析介质与抗体的结合目前,约70-80%的抗体纯化使用ProteinA、ProteinG亲和层析。蛋白A(ProteinA)来源于金黄色葡萄球菌的一个株系,它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上,可以特异性的和样品中的抗体分子结合,而使其他杂蛋白流穿,具有极高的选择性,一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。1个蛋白A分子至少可以结合2个IgG。蛋白A也可以结合另一些免疫球蛋白,如用于某些种属的IgA、I
5、活化的方法,与溴化氰活化方法相比,可获得长短更适合的结合臂,使抗体纯化获得更好的效果。并且这种方法活化的琼脂糖凝胶没有离子交换的作用,因而其死吸附少。二、亲和介质特性: 特点基团脱落少,结合特异性强基质6%的交联琼脂糖凝胶配基重组蛋白G配基密度≈6mg重组蛋白G/ml吸附载量3-7mg鼠IgG2a/ml亲和介质的颗粒大小50-160μm最大流速200cm/hpH范围3-10,在位清洗时pH范围可到2-11使用温度常温保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇 三、适用范围ProteinA和ProteinG的相对结合强度 物种物种亚类亚类proteinA结合proteinG结合人lgA可变- lg