流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识

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'流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识'
生堡捡堕匿堂盘查! ! ! 鱼生! 旦筮! ! 鲞筮! 塑£丛! 』! 坐丛型:丛型! ! ! ! :! ! ! :! ! :盥! :! 流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群 在儿科的临床应用共识 .指南与共识. 中国医师协会儿科医师分会风湿免疫专业委员会中国医师协会儿科医师分会过敏专业委员会 中华医学会儿科分会免疫学组 使用流式细胞术( f l o wc y t o m e t r y ,F C M ) 进行淋 巴细胞亚群分析已广泛应用于临床,在免疫功能评 估上起到不可或缺的作用。由于F C M 淋巴细胞亚 群分析涉及多个参数,且各参数间关系复杂,如何有 效解读、判断分析结果,并指导临床疾病诊断、治疗, 目前还缺乏统一的指导原则。为了科学、合理地将 F C M 淋巴细胞亚群分析应用于临床疾病的诊断、疗 效监测、预后评估等环节,中国医师协会儿科医师分 会风湿免疫专委会、中国医师协会儿科医师分会过 敏专委会及中华医学会儿科分会免疫学组共同制定 F C M 分析淋巴细胞亚群临床应用建议。 一、淋巴细胞亚群分析常规检测项目和报告 内容 F C M 是一种对单细胞或生物颗粒进行多参数、 定量分析的技术,具有速度快、精度高、准确性好等 优点。目前F C M 广泛应用于基础医学与临床学科, 在疾病的诊断、分型、治疗、预后及预防起到重要作 用,其中淋巴细胞亚群分析是临床开展最多的检测 项目。F C M 淋巴细胞亚群分析指借助各种荧光染 料标记的单克隆抗体测定各类淋巴细胞胞膜或胞内 独特的分化抗原( c l u s t e ro fd i f f e r e n t i a t i o n ,C D ) ,对淋 巴细胞的各个亚群进行分析。 常规检测的淋巴细胞亚群包括T 细胞 ( C D 3 + ) 、B 细胞( C D 3 一C D l 9 + ) 和N K 细胞( C D 3 一 C D l 6 + C D 5 6 + ) ;T 细胞又分为两个亚群:辅助性T 细胞( C D 3 + C D 4 + ) 和杀伤性T 细胞( C D 3 + C D 8 + ) 。 F C M 淋巴细胞亚群分析报告提供各个细胞亚群细 胞的相对计数( 百分比) 和绝对计数。 卫生部发布的F C M 检测外周血淋巴细胞亚群 指南( W S /T3 6 0 .2 0 11 ) ?对于规范F C M 在外周血 D O I :1 0 .3 7 6 0 /c m a .j .i s s n .1 0 0 9 - 9 1 5 8 .2 0 1 6 .0 5 .0 0 5 基金项目:国家卫生与计划生育委员会公益性行业科研专项经 费( 2 0 1 4 0 2 0 1 2 ) 通信作者:王晓川,电子信箱:x c h w a n g @ s h m u .e d u .c n 淋巴细胞亚群分析具有重要指导意义。检测过程需 注意标本采集和运输、免疫荧光染色、F C M 检测和 分析、结果报告和审核等方面。 F C M 可以直接测得各淋巴细胞亚群的相对计 数。采用定量微球,用流式细胞仪单平台方法可以 直接获得淋巴细胞亚群绝对计数。如果不用定量微 球,可以采用F C M 测定的淋巴细胞百分比,结合全 血细胞分析仪测定的白细胞数量计算得到淋巴细胞 的绝对计数。建议采用单平台方法进行绝对计数检 测,它减轻了室间变异并避免了多台仪器问的系统 误差。 二、标本采集和运输 F C M 检测淋巴细胞亚群采用外周血标本。首 选乙二胺四乙酸盐( E D T A .K :/E D T A .K ,) 抗凝管采 集淋巴细胞亚群标本,肝素钠或柠檬酸钠抗凝血也 可用于检测,但如标本同时进行白细胞计数分类,则 应选择E D T A 作为抗凝剂。 连续检测的同一患者应固定标本采集时间,标 本采集后可立即检测,不能立即检测的标本应置室 温保存心J ,并在2 4h 内检测。 三、检测对象选择 原则上免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞 亚群。 ( 一) 免疫防御功能受损者 易发生感染,这种感染的特点是反复、严重、多 种病原体或特殊病原体的感染,以及常规治疗效果 不佳的感染。 1 .反复感染:感染次数和频率过高,超出正常 人群,因感染的部位不同,具体反复的次数或频率难 以给出参考标准旧J 。 2 .严重感染:严重感染包括必须进行住院静脉 使用抗感染药物的患者,以及需进行重症监护和抢 救的感染患者HJ 。 3 .多种病原体与特殊病原体感染:包括细菌、 万方数据 生堡捡坠医堂苤查! 鱼! ! 生! 旦箜! ! 鲞筮! 塑鱼! 鱼』! 坐丛型:丛型! ! ! ! :y ! ! :! ! :堕! :! 真菌和( 或) 病毒等多种病原体感染者;低毒病原如 卡介苗、脊髓灰质炎疫苗株等的感染,对于新发现的 病原体种类或病原体不清楚的感染病例尤其应该进 行淋巴细胞亚群的检测。5o ,有助于对疾病状况的评 估。 4 .常规治疗效果不佳的感染:明确病原体种 类,按照常规或指南治疗,除了耐药等原因之外还可 能存在宿主免疫防御的受损,应考虑及时进行淋巴 细胞亚群的检测。 5 .除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见 感染状况之外,感染本身也可造成继发性免疫防御 受损,因此免疫评估应注意原发和继发性两方面的 问题。 ( 二) 免疫自稳和耐受功能受损者 此类患儿易发生自身免疫或自身免疫样疾病及 过敏或过敏样的疾病表现。 1 .过敏性疾病:过敏性疾病是常见多发疾病, 并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检 测。对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群 的检测。 ( 1 ) 婴幼儿时期全身严重湿疹样表现MJ 。 ( 2 ) 嗜酸性粒细胞显著增多¨J 。 ( 3 ) 血清I g E 水平明显增高( I g E 10 0 0I U / L ) ‘8 I 。 ( 4 ) 伴有反复、严重感染的患者。 2 .自身免疫和自身炎症性疾病:自身免疫性疾 病患儿检测淋巴细胞亚群有助于对疾病的免疫状况 及药物治疗影响的评估,以初步了解淋巴细胞各个 亚群可能存在的原发性或继发性异常。 ( 1 ) 存在难以控制的自身免疫反应情况及出现 明显的自身免疫性淋巴增殖情况一。1 ?。 ( 2 ) 合并反复感染的患者。 ( 3 ) 存在自身炎症反应。 ( 4 ) 长期免疫抑制药物、生物制剂使用前 E [ 1 1 ] ,口O ( 三) 免疫监视功能受损者 免疫监视功能受损,主要引起机体发生肿瘤性 改变。 1 .血液系统肿瘤:儿童时期最为多见的是血液 系统肿瘤¨2 I ,这种情况应常规进行淋巴细胞亚群的 评估。 2 .其他肿瘤及实体瘤:其他系统肿瘤患者也应 酌情进行淋巴细胞亚群的检测,既可能存在原发性 淋巴细胞亚群的异常,也可能出现继发性改变,尤其 是进行各种化疗时,淋巴细胞亚群大多会受到影 响‘13 | 。 ( 四) 其他特殊情况 1 .血常规中淋巴细胞明显异常¨4 | 。 2 .家族成员中有免疫缺陷病史。 3 .长期使用免疫抑制剂者。 四、结果判读 淋巴细胞亚群分析结果判读,应对淋巴细胞亚 群的相对计数和绝对计数分别进行判别。 ( 一) 基本数据判断 1 .相对计数的3 个基本公式:F C M 检测淋巴细 胞亚群结果应首先根据下述3 个公式进行评估¨5
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