抗氧化物活性测定方法总结

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'抗氧化物活性测定方法总结'
抗氧化物活性测定方法(倾向于考虑DPPH法和ORAC法)1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[ 杜芹芹、张旭等,人参与附子、黄连配伍的HPLC-ESI-MS研究及抗氧化活性测定。高等学校化学学报。2010,31(7):1332-1336]FRAP(ferric ion reducing antioxidant power)方法,在低pH值的溶液中,Fe3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成有色的Fe2+-TPTZ。反应的结果常以Fe2+当量或标准物质的抗氧化能力表示。该法快速简便、易于操作、重复性好,但FRAP反应属于电子转移(SET)反应,因此FRAP方法不能够测定氢转移反应(HAT)起作用的物质。而且该法实际测定的是待测生物活性物质将Fe3+还原为Fe2+的能力,因此没有抗氧化能力的生物学相关性。2.TEAC法(trolox equivalent antioxidant capacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazoline sulphonic acid-6)ammonium salt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐)与过氧化物酶和氢过氧化物在一起形成ABTS+阳离子自由基。在抗氧化剂存在时,这种自由基混合物的光吸收值下降,下降程度取决于抗氧化剂的抗氧化能力,测得的结果以TEAC表示,即被测抗氧化剂清除ABTS·+的能力(吸光度大小的变化)与标准抗氧化剂trolox(VE的水溶性类似物)清除ABTS·+的能力的比值。TEAC法十分简单,适用于大量样品的分析检测。但是,ABTS·+并非生理自由基,缺乏生理相关性,而且与FRAP方法相似,ABTS·+与不同抗氧化剂问的氧化反应时间不同,因此,只能定性不能定量评价样品的抗氧化能力。3.DPPH法[ 张薇,张惠展,袁勤生。串叶松香草水提液的体外抗氧化活性研究。食品与药品。2012,14(5):168-171,陈树俊1,冯斌 1,刘诚等。山西老陈醋多酚提取物抗氧化活性研究。食品科学,2012,33(1):31-34](2,2-diphenyt-l-picrylhydrazyl radical scavenging capacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是较常用的方法之一。DPPH·是一种稳定的以氮为中心的自由基,其醇溶液呈深紫色,在517nm 处有一吸收峰。当反应系统中存在自由基清除剂时,它可以和DPPH· 的单电子配对而使517nm 处的吸收峰渐渐消退。而且,这种颜色变浅的程度与配对电子数成化学计量关系。因此,根据吸光度的变化可测得抗氧化剂的活性。通过计算DPPH自由基剩余一半时所需抗氧化剂的浓度(EC50)以及时间(TEC50)反应抗氧化物的活性。DPPH法快速、简单,仅需要一台紫外分光光度计就可以测定,但DPPH方法存在的不足是,当被测物与DPPH紫外吸收有重叠时,将会影响测定结果,比如类胡萝卜素。此外,由于空间位阻决定反应的倾向,小分子化合物由于更易接近自由基而拥有相对较高的抗氧化能力。此外该方法线性范围也相对较窄,而且所有还原剂都能够对DPPH起作用,因此结果并不能完全代表抗氧化能力。4.ORAC法: 氧化自由基吸收能力测定ORAC(oxygen radical absorbance capacity)是测定氧化自由基吸收能力,氧化自由基吸收能力又称为抗氧化能力。以Sodium Fluorescein(SF)作为荧光指示物质,以AAPH(2,2`-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐)作为自由基来源,以抗氧化标准物质Trolox作为定量标准。SF受到自由基攻击,在一定波长下荧光度不断衰减,采用荧光分析仪测定其荧光强度衰减变化可计算样品的自由基清除能力。ORAC方法可以提供的自由基与生命现象中的自由基具有高度一致性,ORAC作用原理是一种经典的通过抑制氢转移反应过程终止自由基链式反应。ORAC法测定的是抗氧化剂抑制体系中活性自由基引起的氧化还原反应的能力.ORAC分析方法是一种新的、独特的评价各种物质抗氧化活性的方法,受到美国农业部(USDA)、美国国立卫生院(NIH)、美国宇航局(NASA)及美国哈佛大学(Harvard University)等众多科技研究机构的认可。美国官方分析化学师协会(AOAC)已将其批准为国际AOAC标准方法。同时在产品研发、生产、销售的工业领域中,作为衡量产品抗氧化能力的标准分析方法已受到业内的广泛认同,并成为各进出口企业实行国际标准化质量控制的依据。ORAC法操作方法简便,适用于高通量筛选和进行常规质量控制。主要的不足之处是所需仪器较为昂贵,而且实验对温度和荧光标记物较为敏感,增加了实验的操作难度。5.TRAP法:总自由基清除抗氧化能力法TRAP(total peroxyl radical-trapping antioxidant parameter assay)方法以ABTS(2,2`-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐)作为显色剂,在过氧化氢引发剂AAPH(2,2`-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐)的作用下,可定量生成ABTS自由基,其反应混合液呈蓝色,在734nm出存在强吸收。抗氧化物质与自由基作用后会使反应混合液颜色变浅,在734nm出的吸收度变小,利用比色法可测定自由基清除情况,评价抗氧化能力。以维生素C作为标准参照物,可定量测定总抗氧化值,及TRAP值。TRAP法经常用来测定血浆或血清的总抗氧化能力,因为TRAP法用于测量非酶抗氧化物质,比如谷胱甘肽,维生素C,维生素E,β-胡萝卜素。不足之处是反应终点各异,各个实验室缺乏可比性。6.TOSC法:总氧自由基清除能力检测法TOSC(total oxyradical scavenging capacity)的原理是,ABAP产生的自由基与KMBA(α-keto-γ-methiolbutyric acid)作用可氧化产生乙烯,抗氧化剂的存在可与KMBA竞争结合自由基,从而减少乙烯的产量,最后通过乙烯的减少程度来衡量抗氧化能力的强弱。TOSC法以气相色谱或液相色谱为检测手段,优势是较全的反应机体的中抗氧化能力。TOSC方法简便,灵敏,能够定量分析其抗氧化能力,然而它需要使用气相色谱仪器,也不适合高通量筛选,并且和TRAP法相似,抗氧化物质的浓度与其乙烯的抑制程度没有呈现很好的线性关系,因而很难对样品进行合理的比较。7.F-C法F-C(Folin-Ciocalteu)方法的原理是,Folin-Ciocalteu试剂中的钨钼酸可以和多酚化合物反应生成蓝色化合物,颜色深浅跟多酚含量呈正相关,因此可以通过比色法对多酚总量进行定量,结果以五倍子酸作为标准参考物。F—C法一直被作为一种衡量天然产物中总的酚类含量的方法,此法简单、敏感、精确,然而因为是比色法,必然受到一些物质的干扰,如糖类、抗坏血酸、有机酸等,这些物质会提高酚类的总含量。
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