白僵菌侵染试验

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1、白僵菌侵染黄粉虫试验李益1、目的要求2、白僵菌的基本特征3、侵染过程4、实验用具和材料5、实验步骤6、作业1、目的要求基本了解白僵菌的基本特征和侵染过程，并学习掌握白僵菌的毒力测定方法，比较不同白僵菌的不同浓度毒力大小。2、白僵菌的基本特征白僵菌进行形态学比较研究，白僵菌在25℃恒温箱中培养10d的菌落直径达到2.0～2．9cm，绒状至粉状；初为白色，稍后或变成微黄色、微红色；背面微黄色。分生孢子梗单生或轮生，后形成产孢细胞后者多为球形，有时呈瓶状的圆柱形，弯曲或正直，其顶端延伸变细且弯曲而呈“之”字形的纤维状。在弯曲处长出很短的小梗其

2、上产生分生孢子。3、侵染过程a、分生孢子附着在寄主的表皮上（7h）；b、大量分生孢子萌发产生芽管和附着胞(22h)；c、菌体穿透到寄主表皮层中（28h），伴随着组织溶解（酶的机制），在穿透菌丝的附近，寄主表皮层的片层结构发生变形（机械性）；d、菌丝在表皮层内常平行于片层结构延伸，形成穿透菌丝；e、菌体从表皮层进入到皮细胞层中，随后进入血腔，并在血腔内大量增殖，寄主组织逐渐解体；f、在寄主死体内产生有活力的孢子，并可再侵染分生孢子附着在寄主表皮上（7h）大量分生孢子萌发产生芽管和附着胞(22h)菌体穿透到寄主表皮层中（28h），菌体从表皮

3、层进入到皮细胞层中，随后进入血腔并在血腔内大量增殖，寄主组织逐渐解体在寄主死体内产生有活力的孢子，并可再侵染3、侵染过程4、实验用具和材料实验用具：灭菌培养皿、灭菌滤纸、无菌水、灭菌试管、灭菌镊子、微量移液枪、显微镜、恒温培养箱。实验材料：白僵菌（Beauveriabassiana）Bb-10-12、成品白僵菌、0.1%吐温80湿润剂的0.003mol/LKH2PO4缓冲液。5、试验步骤1、将-4℃保存的白僵菌25±1℃、相对湿度80%±10%下用PDA培养基扩繁培养7天左右。2、带完全产孢后，用含0.1%吐温80湿润剂的0.003mo

4、l/LKH2PO4缓冲液将分生孢子粉湿润、洗脱，磁力搅拌器搅拌混匀，并过滤除去菌丝和杂质。3、用血球计数板在显微镜下计数孢子数，测出其浓度，再用无菌水分别稀释成孢子浓度梯度为109、108个/mL的悬浮液备用。4、采用浸渍法将黄粉虫虫体浸入孢子悬浮液中1秒，对照组浸渍无菌水处理。5、浸渍后放于灭菌滤纸上爬行尽快吸干其身上多余的悬浮液，吸干后把试虫放入培养皿中，（25±1）℃、相对湿度80%±10%饲养。6、每个处理浓度3个重复，每个重复5头（2个浓度用虫）。7、施药后每3d记录一次死虫数，连续调查5次。将死虫挑出保湿培养，记录僵虫数。8

5、、结果统计：毒力结果记录表药剂浓度（个孢子/mL）试虫数(头)施药后3天施药后6天施药后9天施药后12天施药后15天死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）死亡率（%）校正死亡率（%）Bb-10-121091510815成品白僵菌1091510815对照无菌水15将算出各处理（浓度）的校正死亡率换算成机率值，并与时间算出致死中时间（LD50）。6、作业1、将实验结果整理写在实验报告上。2、白僵菌有什么特点，侵染机理是什么？被白僵菌侵染后试虫有什么症状？3、用浸渍法进

6、行白僵菌毒力测定实验，毒力大小是以什么方法进行评定？4、并结合自己所学知识说说真菌药剂和化学药剂有什么不同？