牛副结核(M.pt)ELISA试剂盒使用建议

牛副结核(M.pt)ELISA试剂盒使用建议

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1、牛副结核(M.pt)ELISA试剂盒使用建议96T本试剂盒仅供研究使用。检测范围:8pg/ml-200pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中副结核(M.pt)的含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛副结核(M.pt)水平。用纯化的牛副结核(M.pt)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入副结核(M.pt),再与HRP标记的副结核(M.pt)抗体结合,形成抗体■抗原■酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在

2、酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的副结核(M.pt)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值),通过标准曲线计算样品中牛副结核(M.pt)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(400pg/ml)0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提収,提取按

3、相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于・20°C保存,但应避免反复冻融2.不能检测含N&N3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。200pg/ml5号标准品150(11的原倍标准品加入150

4、11标准品稀释液100pg/ml4号标准品150卩1的5号标准品加入150卩1标准品稀释液50pg/ml3号标准品150)41的4号标准品加入150^1标准品稀释液25pg/ml2号

5、标准品150(11的3号标准品加入150^1标准品稀释液12.5pg/ml1号标准品150j.il的2号标准品加入150j.il标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10Pl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸徭水30倍稀释后

6、备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,丿11干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50(11,空白孔除外。1.温育:操作同3。&洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50M,再加入显色剂B50

7、il,轻轻震荡混匀,37°C避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50(11,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂,样品和标准品计算以标

8、准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线冋归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15・30分钟后方对使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋屮保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其進确性,以避免试验误差。

9、一次加样吋间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。1.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标木屮待测物质含暈过高(样木0D值大于标准品孔第一孔的0D值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5)。2.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。3.底物请避光保存。4.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。6.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8°C

10、o2.有效期:6个月

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